[发明专利]人H-FABP胶体金检测试纸及其制备方法

摘要

一种人H-FABP胶体金检测试纸的制备方法，包括胶体金颗粒的制备、金标记抗体的制备、金标结合物垫的制备、包被硝酸纤维素膜、样品处理垫的制备及试纸的组装等步骤，本发明主要通过对检测试纸制备过程中的缓冲溶液体系进行设计，解决了现有的检测试纸存在的检测时间长、特异性差以及经济成本高等问题。本发明还公开了一种人H-FABP胶体金检测试纸及其应用。

主权项

一种人H‑FABP胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)胶体金颗粒的制备利用柠檬酸三钠还原法，采用磁力加热搅拌器烧制颗粒均一的直径约为40nm的胶体金颗粒，分光光度计测其最高峰在530±5nm，OD值在2.0±0.2；(2)金标记抗体的制备利用碳酸钾将制备好的胶体金溶液调节PH至7.5±0.05，再用双蒸水或PBS稀释标记抗体至浓度为1mg/ml，然后逐滴加入搅拌的胶体金溶液中，保持搅拌10‑15min，加10％BSA至终浓度为0.2％封闭裸露金颗粒，继续搅拌20‑30min，4℃，4000r/min离心30min，利用缓冲溶液4重悬洗涤，再离心，重复2次，浓缩备用；缓冲溶液4由磷酸缓冲液和吐温‑20组成，其中磷酸缓冲溶液摩尔浓度为10‑100mM，吐温‑20质量终浓度为0.05％‑0.1％；(3)金标结合物垫的制备利用缓冲溶液1处理金标结合物垫，在室温、湿度＜20％的条件下过夜干燥备用，并使用喷膜仪将金标记的标记抗体喷于处理好的金标结合物垫上并真空冷冻干燥备用；缓冲溶液1由Tris‑Hcl、蔗糖、BSA、柠檬酸三钠和曲拉通‑100组成，其中Tris‑Hcl摩尔浓度为10‑100mM，蔗糖质量终浓度为3％‑10％，BSA质量终浓度为1％‑3％，柠檬酸三钠质量终浓度为0.5％‑1.0％，曲拉通‑100质量终浓度为0.1％‑0.5％；(4)包被硝酸纤维素膜将捕捉抗体和羊抗鼠分别用缓冲溶液3稀释，使用划膜仪划膜包被于硝酸纤维素膜检测区和质控区，37℃干燥48小时备用；缓冲溶液3由Tris‑Hcl和蔗糖组成，其中Tris‑Hcl摩尔浓度为10‑100mM，蔗糖质量终浓度为1％‑5％；(5)样品处理垫的制备利用缓冲溶液2浸泡玻璃纤维样品垫，在室温、湿度＜20％的条件下过夜干燥，切割备用；缓冲溶液2由Tris‑Hcl、BSA、聚乙烯吡咯烷酮、S16和吐温‑20组成，其中Tris‑Hcl摩尔浓度为10‑100mM，BSA质量终浓度为0.5％‑5％，聚乙烯吡咯烷酮质量终浓度为0.5％‑5％，S16质量终浓度为0.05％‑1.0％，吐温‑20质量终浓度为0.01％‑0.5％；(6)试纸的组装按样品垫、金标结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺序粘附于支撑底板上组装试纸，并切割，包装；其中所述标记抗体与捕捉抗体为二株可互相形成夹心配对的抗人H‑FABP抗体。