[发明专利]人H-FABP胶体金检测试纸及其制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及体外诊断医学检验领域，具体涉及一种人心脏型脂肪酸结合蛋白(Heart-type Fatty Acid Binding Protein，H-FABP)胶体金检测试纸及其制备方法。

【背景技术】

近年来心脑血管疾病特别是急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)成为了我国人群患病率极高，死亡率稳居榜首的杀手。在治疗的“黄金6h”内使患者迅速进入绿色治疗通道，能够大大降低致残率和致死率。所以对于AMI准确、快速的诊断具有重要的医学意义。

H-FABP作为早期心肌诊断的一种小分子可溶性蛋白生化标志物，它存在于心肌细胞胞浆内，含量丰富，当心肌受损时，心肌细胞膜完整性被破坏，H-FABP可快进入血液，在发病0-3h即可在血液中检测到，3-6h达到峰值，12-24h恢复正常水平，其具有心肌特异性，在心肌中浓度约为骨骼肌的210倍，且正常人血液中含量极少(<5ng/ml)，所以H-FABP作为早期AMI的检测指标有其重要意义。

目前H-FABP的检测方法主要有放射免疫法、酶联免疫法、光栅耦合传感器技术、时间分辨免疫荧光测定法、快速乳胶微粒增强免疫比浊法、免疫传感器技术等。虽然这些方法灵敏度高，特异性好，但是这些检测方法需要特殊大型仪器，操作复杂、检测时间较长，不利于社区基层医院推广利用。专利CN102298055A和CN102226811A公开了应用免疫胶体金技术对H-FABP进行检测的相关技术，前者应用金纳米壳颗粒代替实心金颗粒作为标记物，使检测结果易于观察，灵敏度＜7ng/ml，但是其制备工艺复杂，检测时间长达15-30min。后者通过检测尿液中的H-FABP，缩短了检测时间，具有无创性、样本无需处理的优势，但是其制备过程需用银增强法，提高了经济成本。另一发面，H-FABP在尿液中出现时间晚于静脉血，不利用患者快速进入治疗通道。因此，该等技术公开的胶体金检测技术存在检测时间长、诊断敏感度、特异性不好等问题。例如，梁晓芳等在其文章中指出，利用已上市H-FABP胶体金检测产品诊断AMI的敏感度仅为86.27％，特异性为84.91％(梁晓芳，崔建国，李春坚等，心脏型脂肪酸结合蛋白快速诊断试纸在急性心肌梗死患者中的应用研究[J].南京医科大学学报(自然科学版)，2009，29(8):1133-1137)。此外，用于心肌类产品研发的主要生物原料即抗体对一般均采用进口抗体，经济成本较高，导致终端产品价位偏高，不利于POCT在社区基层医院的推广应用。

【发明内容】

本发明解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，提供一种人H-FABP胶体金检测试纸，该检测试纸具有检测时间短、特异性好，经济成本低等优点。

本发明还提供一种所述人H-FABP胶体金检测试纸的制备方法。

本发明又提供一种所述人H-FABP胶体金检测试纸在检测人血液中H-FABP的应用。

本发明再提供一种所述人H-FABP胶体金检测试纸在检测人尿液中H-FABP的应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：1.一种人H-FABP胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)胶体金颗粒的制备

利用柠檬酸三钠还原法，采用磁力加热搅拌器烧制颗粒均一的直径约为40nm的胶体金颗粒，分光光度计测其最高峰在530±5nm，OD值在2.0±0.2；

(2)金标记抗体的制备

利用碳酸钾将制备好的胶体金溶液调节PH至7.5±0.05，再用双蒸水或PBS稀释标记抗体至浓度为1mg/ml，然后逐滴加入搅拌的胶体金溶液中，保持搅拌10-15min，加10％BSA至终浓度为0.2％，封闭裸露金颗粒，继续搅拌20-30min，4℃，4000r/min离心30min，利用缓冲溶液4重悬洗涤，再离心，重复2次，浓缩备用；缓冲溶液4由磷酸缓冲液和吐温-20组成，其中磷酸缓冲溶液摩尔浓度为10-100mM，吐温-20质量终浓度为0.05％-0.1％；

(3)金标结合物垫的制备

利用缓冲溶液1处理金标结合物垫，在室温、湿度＜20％的条件下过夜干燥备用，并使用喷膜仪将金标记的标记抗体喷于处理好的金标结合物垫上并真空冷冻干燥备用；缓冲溶液1由Tris-Hcl、蔗糖、BSA、柠檬酸三钠和曲拉通-100组成，其中Tris-Hcl摩尔浓度为10-100mM，蔗糖质量终浓度为3％-10％，BSA质量终浓度为1％-3％，柠檬酸三钠质量终浓度为0.5％-1.0％，曲拉通-100质量终浓度为0.1％-0.5％；