[发明专利]人H-FABP胶体金检测试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种人H-FABP胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)胶体金颗粒的制备

利用柠檬酸三钠还原法，采用磁力加热搅拌器烧制颗粒均一的直径约为40nm的胶体金颗粒，分光光度计测其最高峰在530±5nm，OD值在2.0±0.2；

(2)金标记抗体的制备

利用碳酸钾将制备好的胶体金溶液调节PH至7.5±0.05，再用双蒸水或PBS稀释标记抗体至浓度为1mg/ml，然后逐滴加入搅拌的胶体金溶液中，保持搅拌10-15min，加10％BSA至终浓度为0.2％封闭裸露金颗粒，继续搅拌20-30min，4℃，4000r/min离心30min，利用缓冲溶液4重悬洗涤，再离心，重复2次，浓缩备用；缓冲溶液4由磷酸缓冲液和吐温-20组成，其中磷酸缓冲溶液摩尔浓度为10-100mM，吐温-20质量终浓度为0.05％-0.1％；

(3)金标结合物垫的制备

利用缓冲溶液1处理金标结合物垫，在室温、湿度＜20％的条件下过夜干燥备用，并使用喷膜仪将金标记的标记抗体喷于处理好的金标结合物垫上并真空冷冻干燥备用；缓冲溶液1由Tris-Hcl、蔗糖、BSA、柠檬酸三钠和曲拉通-100组成，其中Tris-Hcl摩尔浓度为10-100mM，蔗糖质量终浓度为3％-10％，BSA质量终浓度为1％-3％，柠檬酸三钠质量终浓度为0.5％-1.0％，曲拉通-100质量终浓度为0.1％-0.5％；

(4)包被硝酸纤维素膜

将捕捉抗体和羊抗鼠分别用缓冲溶液3稀释，使用划膜仪划膜包被于硝酸纤维素膜检测区和质控区，37℃干燥48小时备用；缓冲溶液3由Tris-Hcl和蔗糖组成，其中Tris-Hcl摩尔浓度为10-100mM，蔗糖质量终浓度为1％-5％；

(5)样品处理垫的制备

利用缓冲溶液2浸泡玻璃纤维样品垫，在室温、湿度＜20％的条件下过夜干燥，切割备用；缓冲溶液2由Tris-Hcl、BSA、聚乙烯吡咯烷酮、S16和吐温-20组成，其中Tris-Hcl摩尔浓度为10-100mM，BSA质量终浓度为0.5％-5％，聚乙烯吡咯烷酮质量终浓度为0.5％-5％，S16质量终浓度为0.05％-1.0％，吐温-20质量终浓度为0.01％-0.5％；

(6)试纸的组装

按样品垫、金标结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺序粘附于支撑底板上组装试纸，并切割，包装；

其中所述标记抗体与捕捉抗体为二株可互相形成夹心配对的抗人H-FABP抗体。

2.如权利要求1所述的人H-FABP胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于，所述的H-FABP为人血液中的H-FABP或人尿液中的H-FABP。

3.如权利要求1所述的人H-FABP胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液4中磷酸缓冲溶液摩尔浓度为10mM，吐温-20质量终浓度为0.1％；所述缓冲溶液1中Tris-Hcl摩尔浓度为10mM，蔗糖质量终浓度为10％，BSA质量终浓度为3％，柠檬酸三钠质量终浓度为0.5％，曲拉通-100质量终浓度为0.5％；所述缓冲溶液3中Tris-Hcl摩尔浓度为10mM，蔗糖质量终浓度为5％；所述缓冲溶液2中Tris-Hcl摩尔浓度为100mM，BSA质量终浓度为1％，聚乙烯吡咯烷酮质量终浓度为1％，S16质量终浓度为0.5％，吐温-20质量终浓度为0.05％。

4.如权利要求1所述的人H-FABP胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于，所述支撑底板为PVC或PS板。

5.如权利要求1所述的人H-FABP胶体金检测试纸的制备方法，其特征在于，所述的金标结合物垫为玻璃纤维或聚酯膜。

6.一种如权利要求1-5中任一项所述的制备方法制成的人H-FABP胶体金检测试纸。

7.如权利要求6所述的人H-FABP胶体金检测试纸，其特征在于，所述样品垫位于支撑底板一端，该样品垫的一端位于金标结合物垫上，与金标结合物垫交错重叠2mm；所述金标结合物垫位于硝酸纤维素膜上，与所述硝酸纤维素膜交错重叠2mm；吸水垫则在支撑底板的另一端，位于所述硝酸纤维素上，与所述硝酸纤维素交错重叠2-3mm。

8.一种如权利要求6所述的人H-FABP胶体金检测试纸在检测人血液中H-FABP的应用。

9.一种如权利要求6所述的人H-FABP胶体金检测试纸在检测人尿液中H-FABP的应用。