[发明专利]一种基于酶切作用的胰蛋白酶和糜蛋白酶电化学同时检测方法

摘要

本发明公开了一种基于酶切作用的胰蛋白酶和糜蛋白酶电化学同时检测方法，属于电化学传感技术领域。通过金-巯键作用将DNA-多肽复合物固定到金电极表面，再利用DNA杂交反应捕获DNA-金纳米粒子-电子介体纳米信号探针。当靶标蛋白酶存在时，胰蛋白酶剪切多肽上的精氨酸羧基位点，糜蛋白酶剪切另一条多肽上的酪氨酸羧基位点，使得连接于多肽上的相应的纳米信号探针脱离电极表面，导致相应电子介体的峰电流下降，据此，可实现胰蛋白酶和糜蛋白酶的灵敏性和选择性同时检测。

主权项

一种基于酶切作用的胰蛋白酶和糜蛋白酶电化学同时检测方法，其特征在于：将电化学传感器浸入含有胰蛋白酶和糜蛋白酶的溶液中反应25分钟，胰蛋白酶剪切多肽1上的精氨酸羧基位点，糜蛋白酶剪切多肽2上的酪氨酸羧基位点，使得连接于多肽上的相应的纳米信号探针脱离电极表面，导致相应的电子介体硫堇和二茂铁的峰电流下降，随着胰蛋白酶和糜蛋白酶浓度的增大，硫堇和二茂铁的峰电流逐渐减小，峰电流减小的程度分别与胰蛋白酶和糜蛋白酶在0.006‑0.18 μg/mL和0.0055‑0.25 μg/mL范围内呈良好的线性关系，检测限分别为2.5 ng/mL和1.6 ng/mL，表明本发明建立传感方法可用于对多种蛋白酶的高灵敏和特异性同时检测。