[发明专利]基于纳米金的HPV基因分型检测方法

摘要

本发明揭示了一种基于纳米金的HPV基因分型检测方法，该检测方法中引入的信号物质为纳米金，利用金能够置换出银的原理，使待检测核酸片段做不对称PCR扩增后连上纳米金，并与基因芯片上的寡核苷酸探针杂交，最后银染显色，直接观测或使用平板扫描仪进行HPV基因分型记录分析。本发明通过在目视化芯片中由于引入了纳米金，使得芯片所产生的信号不再需要特殊昂贵的仪器进行检测，肉眼就可以直接观测且纳米金没有污染对人体没有伤害。该方法具有高通量，高灵敏的，且廉价等优点，因而具有广阔的市场前景。

主权项

一种基于纳米金的HPV基因分型检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从生物样品中提取出待测核酸片段，用PCR扩增引物对所述待测核酸片段作不对称PCR扩增，得到目的核酸片段，所述PCR扩增引物包括第一HPV引物和第二HPV引物，其中所述第一HPV引物和第二HPV引物的序列分别为：第一HPV引物：TTTGTTACTGTGGTAGATACTAC第二HPV引物：GAAAAATAAACTGTAAATCATATTC；2)将纳米金与标记引物P1的3′端或5′端共价连接，形成HPV纳米金标记探针，并与步骤1)中的所述目的核酸片段混合，其中所述标记引物P1的序列为：P1：GAATATGATTTACAGTTTATTTTTC：3)将各型别的HPV寡核苷酸探针点样到基因芯片上，在所述基因芯片上进行目的核酸片段与HPV寡核苷酸探针的杂交反应；4)对所述步骤3)中杂交后的产物清洗后银染显色及分析，目视化观察结果。