[发明专利]油菜转基因检测试剂盒

摘要

本发明涉及检测用品领域内的一种油菜转基因检测试剂盒，由引物组合和膜芯片组成，其特征在于引物组合为11重双启动寡核苷酸引物组合，膜芯片为顺序固定在支持膜表面的11组探针序列和一组阳性对照探针序列，各探针的5’端做氨基标志；引物组合中有非对称PCR扩增引物，为5’端带生物素标志的Tag引物。本发明克服了现有技术费时费力成本高的缺陷，提供的油菜转基因检测试剂盒操作简单，快速灵敏，检测通量大，检测结果可视化，成本低廉。

主权项

一种油菜转基因检测试剂盒由引物组合和膜芯片组成，其特征在于引物组合为11重双启动寡核苷酸引物组合，各对引物的碱基序列5’‑3’如下，其中碱基I为次黄嘌呤核苷酸：EPSPS：正向引物： CTTTCTGGAACCGTCCGTATIIIIIGTGACAA反向引物：CCAAGTATCACCTTCCTTACIIIIICTGGCAC；GOX：正向引物：CTGCTGCTCCTAACTGGAAGIIIIITCACGTT反向引物：GGTCATTGGAGCACCAGTCAIIIIIAGGTGAC；PAT：正向引物： TGAGACGTCTACAGTGAACTIIIIIACAGAGC反向引物：CTTCCAGGGCCCAGCGTAAGIIIIICCAGCCA；NPTII：正向引物： CGAAGTGCCGGGGCAGGATCIIIIITCATCTC反向引物：CGCGAGCCCCTGATGCTCTTIIIIIAGATCAT；BAR：正向引物： GACGACCTCGTCCGTCTGCGIIIIIGCTATCC反向引物：CAGCAGGTGGGTGTAGAGCGIIIIICCCAGTC；BARNASE：正向引物： ATTATCGTGGATTTCCGTTTIIIIICTGGTGC反向引物：GCTTATGATATGTCTGAAGAIIIIICGCAACC；BARSTAR：正向引物： CCTGGACGCTTTATGGGATTIIIIIACCGGAT反向引物：TTCCGCTTTCGCTTCACGGAIIIIITGAAGCA；FMV35S：正向引物： GGAAGAATTCTCAGTCCAAAIIIIIAACAAGG反向引物： CAAAGATGCCCACTAACTTTIIIIITTCGGTG；CaMV35S：正向引物：GATAAAGGAAAGGCCATCGTIIIIIATGCCTC反向引物：TGGGATTGTGCGTCATCCCTIIIIICAGTGGA；NOS 3’：正向引物： TTAAGATTGAATCCTGTTGCIIIIITTGCGAT反向引物：CGCGCGCGATAATTTATCCTIIIIIGCGCGCT；PEP：正向引物： ATACGCTACAACTACCAATAIIIIICGAGTGG反向引物：GGAAAAAAGGTCGAGAAGTTIIIIICACGAGG；膜芯片为顺序固定在支持膜表面的11组探针序列和一组阳性对照（Positive）探针序列，11组探针序列和阳性对照探针序列的碱基序列5’‑3’如下，各探针的5’端做氨基标志：EPSPS探针: NH₂‑5’‑TATCACCGGTCTTTTGGAAGGTGAAGATGTTATCAACACTGGTAAGGCTATGCAAGCTA‑3’；GOX探针: NH₂‑5’‑CCCTTCCAGTGATTGGTCGTGCTACCCGTACTCCAGACGTTATCTACGCTTTCGGTCAC‑3’；PAT探针: NH₂‑5’‑GGATTGATGATCTAGAGAGGTTGCAAGATAGATACCCTTGGTTGGTTGCTGAGGTTGAG‑3’；NPTII探针: NH₂‑5’‑CACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCGGATGGAAGCCGGTCTTGTCGA‑3’；BAR探针: NH₂‑5’‑CGCAACGCCTACGACTGGACGGCCGAGTCGACCGTGTACGTCTCCCCCCGCCACCAGCG‑3’；BARNASE探针: NH₂‑5’‑AACGGAAACATCTTCTCACAAGGCACACACAGAAGCACAGGTTATCAACACGTTTGACG‑3’；BARSTAR探针: NH₂‑5’‑CGTTTTGGAATGGAGGCAGTTTGAACAAAGCAAGCAGCTGACTGAAAATGGCGCCGAGA‑3’；FMV35S探针: NH₂‑5’‑CAAAGTAAACTACTGTTCCAGCACATGCATCATGGTCAGTAAGTTTCAGAAAAAGACAT‑3’；CaMV35S探针: NH₂‑5’‑AGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATG‑3’；NOS 3’探针: NH₂‑5’‑ATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAA‑3’；PEP探针: NH₂‑5’‑GAGATTTTTCCAAGGCTTCAAACTCTTTCATCACATGTCTCTTCTCTTTCCATTGTCTT‑3’；Positive探针: NH₂‑5’‑TAGCAAGGATGAGTATTCGAACAGTTAGAGGCAGTCAGGGAGAATCACTACGTACAAGC‑3’。