[发明专利]一种基于亲水固相萃取技术的蟾蜍二烯内酯类化合物类分离纯化方法

摘要

本发明提供了一种基于亲水固相萃取技术的蟾蜍二烯内酯类化合物类分离纯化方法。采用键合两性离子基团的Click XIon亲水固相萃取柱联合半制备反相色谱柱选择性类分离蟾蜍二烯内酯类化合物的纯化方法。选取蟾蜍皮95%乙醇提取物反相色谱制备分离所得的一个馏分，采用Click Xion亲水固相萃取柱分成氨基酸修饰的蟾蜍二烯内酯类组分和非氨基酸修饰的蟾蜍二烯内酯类组分，通过反相色谱对两组分分别制备，共获得七个化合物。该方法可以实现氨基酸修饰的蟾蜍二烯内酯类和非氨基酸修饰的蟾蜍二烯内酯类化合物的类分离及高效制备，解决了两类化合物在反相柱上疏水性相似，洗脱窗口窄的问题，实现了类分离，并表现出较好的分离效果。

主权项

一种蟾蜍二烯内酯类化合物选择性分离的纯化方法，其特征在于：1）蟾蜍皮乙醇提取物先经制备型RPLC分离，水（A）和甲醇（B）流动相体系；洗脱梯度为体积浓度25%→100%B（v/v）；按各色谱峰的保留时间分别收集各馏分，每个组分浓缩至干后备用；2）针对富含蟾蜍二烯内酯的组分F14，分离过程中F14组分对应的流动相中甲醇的体积浓度为58.3%‑59.6%；采用Click XIon亲水固相萃取柱对两类化合物进行类分离，固相萃取条件：亲水固相萃取柱为两性离子固相萃取柱（Click XIon，20g/60mL）；淋洗条件为：淋洗1：95%（v/v）乙腈‑水或乙醇‑水80mL，回收溶剂得F14‑F1；淋洗2：50%（v/v）乙腈‑甲酸水或乙醇‑甲酸水80mL，（酸水体积浓度为0.1%‑0.5%）回收溶剂得F14‑F2；3）针对F14‑F1和F14‑F2，采用半制备反相色谱进行进纯化制备，色谱柱为XCharge C18柱；采用乙腈‑水溶液或甲醇‑水溶液流动相体系，对蟾蜍二烯内酯类化合物进行选择性地分离。