[发明专利]一种覆盖野生稻全基因组杂合片段导入系的构建方法

摘要

本发明涉及一种覆盖野生稻全基因组杂合片段导入系的构建方法，属于生物技术领域，通过连续回交和自交，并借助于分子标记辅助选择，而构建杂合片段导入系群体，以达到提高基因克隆的速度和降低实验成本目的，为开展是水稻杂种优势的机理研究提供较为理想的基础材料。野生稻含有丰富的有利基因源，包含各种优质、高产、病虫害抗性和非生物逆境的耐性基因等，杂合片段导入系群体构建，有利于鉴定这些性状等位或新基因，有利于丰富栽培稻的遗传基础。

主权项

一种覆盖野生稻全基因组杂合片段导入系的构建方法，其特征在于：其主要包括亲本选择、杂交、回交、目标标记检测、自交、目标标记检测；具体步骤如下：（1）亲本选择：供体亲本为野生稻，受体亲本要求与野生稻遗传背景有明显差异；（2）亲本杂交：受体亲本为母本，供体亲本为父本，杂交单株一般随机3‑5株；（3）回交：从F₁代开始，随机选择20‑25株与受体亲本回交，得到BC₁F₁；每个株系随机选择3株与受体亲本回交，得到55‑65个BC₂F₁株系；每个株系随机选择3株与受体亲本回交，得到170‑190个的BC₃F₁株系；每个株系随机选择3株与受体亲本回交，最终得到530‑550个BC₄F₁株系；其次，再遇到缺失的杂合片段时，是在BC₂F₁代保留部分株系，后期仅用缺失目标标记进行筛选，将含有缺失目标基因的单株再进行回交；（4）目标标记检测：先用23‑25对多态性较好的引物，平均每条染色体2对引物，分别分布在染色体的长臂和短臂上，对所有个体进行分析，筛选含有1个或1个以下杂合片段的单株，然后对保留的单株进行全基因组基因型分析；（5）自交：对单株进行全基因组基因型分析后，选取有2个以下杂合片段的单株自交，并进行套袋，然后收种；（6）目标标记检测：入选单株种植，含有1个杂合片段每个株系种植50‑300株，含有2个杂合片段的每个株系种植100‑400株；（7）杂合片段导入系单株筛选：用目标标记对种植株系单株进行检测分析，选择含有目标标记杂合单株；同时含有目标标记纯合单株也进行保留。