[发明专利]沙拐枣染色体核型的分析方法

摘要

本发明公开沙拐枣染色体核型的分析方法。通过种子萌发种子采用98％的浓硫酸预处理，采用沙子种床，种子与沙子按体积比1∶10的比例，培养皿在使用前进行121℃高温灭菌30min，种子萌发培养种床的制作、种子根尖染色体实验，种子根尖染色体解离采用1M盐酸60℃恒温水浴解离20-40min，提供一种简单适用的沙拐枣染色体核型的技术方法，达到获得实验室内容易得到根尖材料的种床及培育条件，以及清晰的、分离状态佳的、染色效果好的可用于分析其核型的染色体制片技术效果，为飞播、人工种植和调运种子、正确地反映种子用途提供理论依据都具有重要意义，为沙拐枣的科学理论研究提供实验条件基础。

主权项

沙拐枣染色体核型的分析方法，其特征在于，所述的分析方法具体步骤如下：(1)种子萌发种子的预处理：采用98g/mol的浓硫酸预处理梯度实验，处理时间为20‑45min，处理好的种子用流动的水冲洗30‑45min；(2)种子萌发培养种床的制作：采用沙子种床，种子与沙子按体积比1∶10的比例，培养皿在使用前进行121℃高温灭菌30min，灭菌后取沙子铺垫于培养皿底层，沙子全覆盖培养皿底层；滴蒸馏水，要求蒸馏水完全渗透沙子底部，但不得有流动水迹象；将冲洗干净的种子小心移放在沙面，盖上培养皿盖，写上标记；(3)种子萌发与发芽统计：将培养皿放在恒温箱中培养，白天光照8‑14小时，25‑35℃；夜晚黑暗10‑16小时，18‑25℃；每天浇水，保持水分充足，做好发芽统计；(4)种子根尖染色体实验步骤中，根尖预处理与固定：待上述步骤(3)中的沙拐枣根尖发芽，剪去1cm根尖，将根尖放入0.002mol/L的8‑羟基喹啉中预处理3‑4小时，取出根尖，用蒸馏水冲洗1‑2遍，然后于卡诺氏液中在4℃的冰箱中固定12‑24小时，固定完毕，用蒸馏水冲洗1‑2遍；卡诺氏液由酒精与冰醋酸按体积比3∶1组成；(5)种子根尖染色体实验步骤中，解离采用1M盐酸60℃恒温水浴解离，解离就是要用药液使组织的细胞相互分离开来，便于最后制片时能被压成一薄层进行显微观察，解离时间为20‑40min；(6)种子根尖染色体实验步骤中，进行染色和镜检，染色前一定要把解离液漂洗干净，用50％的乙醇和蒸馏水交替洗；将漂洗干净的根尖放在青霉素小瓶中，滴3‑5ml碱性品红染液，使染液没过根尖，将青霉素小瓶盖上皮塞，放于黑暗处染色，染色时间为15h‑25h。