[发明专利]一种克隆猪Sox6基因编码区全序列的方法

摘要

本发明公开了一种克隆猪Sox6基因编码区全序列的方法，包括以下步骤：A1、提取猪背最长肌中的总RNA，将其反转录成cDNA；A2、引物的设计及PCR反应：根据已知的小鼠、大鼠和人的Sox6编码区序列，设计一对简并引物，上游引物自起始密码子处设计，下游引物至终止密码子处设计，设计的引物为：上游引物（pSOX6CDS F）：5’-ATGTCTTCCAAGCAAGCCACCTCTCC-3’，下游引物（pSOX6CDS R）：5’-TCAGTTGGCACTGACAG(C/G)(T/C)TC(T/C)GGG-3’；A3、PCR产物的回收和纯化；A4、克隆。提供一种简单、快捷的获取猪Sox6基因编码区全序列的方法，填补了该基因在猪上的空白，为进一步研究猪Sox6功能及应用奠定了基础。

主权项

一种克隆猪Sox6基因编码区全序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：A1、提取猪背最长肌中的总RNA，将其反转录成cDNA；A2、引物的设计及PCR反应：根据已知的小鼠、大鼠和人的Sox6编码区序列，设计一对简并引物，上游引物自起始密码子处设计，下游引物至终止密码子处设计，设计的引物为：上游引物（pSOX6CDS F）：5’‑ATGTCTTCCAAGCAAGCCACCTCTCC‑3’下游引物（pSOX6CDS R）：5’‑TCAGTTGGCACTGACAG(C/G)(T/C)TC(T/C)GGG‑3’PCR反应体系为50μL[ddH₂O27μL，10×LA PCR Buffer Ⅱ（Mg2⁺ free）5μL，dNTP mixture（2.5mM each）8μL，MgCl₂（25mM）5μL，上下游引物（10μM）各2μL，cDNA（模板）0.5μL，TaKaRa LA Taq（5units/μL）0.5μL]；PCR反应条件均为95℃预变性3min，然后进行95℃30s，55℃30s，72℃3min，共35个循环，最后再72℃延伸10min；A3、PCR产物的回收和纯化；A4、克隆。