[发明专利]特异结合性或功能性蛋白的转座介导鉴定

摘要

在此公开的方法描述了一种前所未有地高效、灵活、实用和高速的用于探索和优化具有期望的结合特异性和/或功能性的多肽(包括抗原结合分子，例如抗体及其片段)以获得期望的功能性和/或结合性表型的新型科技。该新方法基于：转座结构和克隆入转座载体的多样化DNA文库，及其通过功能性转座酶的共同瞬态表达对宿主细胞进行转染。这保证了高效稳定地将基于转座子的表达载体一步引入脊椎动物宿主细胞，随后筛选所述细胞中表达的蛋白的期望功能性或结合性表型，然后可以通过标准的克隆和DNA测序技术，鉴定所述表达蛋白的相关编码序列，包括抗体及其片段。

主权项

一种用于识别具有期望的结合特异性或功能性的多肽的方法，包括以下步骤：(i)生成多核苷酸的多样化集合，优选为质粒载体或双链DNA PCR扩增子，所述多核苷酸编码具有不同结合特异性或功能性的多肽，其中所述多核苷酸包含编码位于第一和第二末端反向重复序列之间的多肽的序列，且所述第一和第二末端反向重复序列被至少一种转座酶识别并作用；(ii)将(i)所述的多核苷酸的多样化集合引入宿主细胞中；(iii)在所述宿主细胞中表达至少一种作用于所述末端反向重复序列的转座酶，从而令所述多核苷酸的多样化集合被整合到所述宿主细胞基因组中，以提供表达所述编码具有不同结合特异性或功能性的多肽的多核苷酸的多样化集合的宿主细胞群；(iv)筛选所述宿主细胞，以识别表达具有期望的结合特异性或功能性的多肽的宿主细胞；以及(v)从所述宿主细胞分离出编码所述多肽的多核苷酸序列。