[发明专利]用于抗体纯化的载体、其制备方法及其应用

摘要

本发明的目的是提供其上固定有蛋白A的载体及所述载体的制备方法，所述蛋白A具有允许抗体在其中许多抗体不必经受酸修饰的温和pH条件(具体地，pH 4.0至5.5)下解吸的特定氨基酸序列；及所述载体的制备方法。一种固定化载体(不包括具有整体结构的固定化载体)，其上通过静电相互作用吸附有蛋白，所述蛋白由通过通式R1‑R2‑R3‑R4‑R5‑R6表示的氨基酸序列组成，其中由R1‑R2‑R3表示的部分被用于固定至固定化载体上，其中该序列表示从氨基末端侧到羧基末端侧的序列；R2部分的序列是作为待被固定的蛋白的蛋白A突变体的序列，或其中蛋白A突变体的序列的1至3个单位被连接在一起的序列，所述蛋白A突变体具有在中性条件下与抗体强烈结合并在pH 4.0至5.5的弱酸性条件下与在中性条件下结合的抗体解离的特性。

主权项

一种固定化载体，所述固定化载体不具有整体结构，蛋白通过静电相互作用吸附在所述固定化载体上，所述整体结构是指具有从顶面至底面贯穿延伸的大孔的多孔体，所述多孔体的特征在于在所述大孔里面具有微孔，并且所述多孔体具有1至100μm的大孔和0至100nm的微孔，所述蛋白由通过通式：R1‑R2‑R3‑R4‑R5‑R6表示的氨基酸序列组成，其中由R1‑R2‑R3表示的部分被用于固定在所述固定化载体上，其中：所述序列表示从氨基末端侧到羧基末端侧的序列；R1部分的序列可不存在，且如果存在，是包含除赖氨酸和半胱氨酸残基之外的氨基酸残基的序列；R2部分的序列是由SEQ ID NO:4至7的任何序列组成的蛋白A的A‑结构域的突变体蛋白的序列，或其中由SEQ ID NO:4至7的任何序列组成的蛋白A的A‑结构域的突变体蛋白的序列的1至3个单位被连接在一起的序列；R3部分的序列可不存在，且如果存在，是包含除赖氨酸和半胱氨酸残基之外的氨基酸残基的间隔序列；R4部分的序列是包含由半胱氨酸‑X表示的2个氨基酸残基的序列，其中X表示丙氨酸或除丙氨酸和半胱氨酸之外的氨基酸残基；R5部分的序列可不存在，且如果存在，是不包含赖氨酸和半胱氨酸残基的序列，以及是包含能够使得由通过通式：R1‑R2‑R3‑R4‑R5‑R6表示的氨基酸序列组成的整个蛋白的等电点在酸性侧的酸性氨基酸残基的序列；且R6部分的序列是用于蛋白纯化的亲和标签序列。