[发明专利]高密度发酵生产聚苹果酸的方法

摘要

本发明公开了一种高密度发酵生产聚苹果酸的方法，属于微生物发酵领域。所述高密度发酵生产聚苹果酸的方法是通过两阶段调控pH和溶氧，第一阶段使菌体大量生长，；第二阶段改变pH和溶氧，使聚苹果酸大量积累。本发明提供了一种生产聚苹果酸的方法，操作简单，效果明显，既缩短了发酵周期，又大大提高了聚苹果酸的生产效率；高密度发酵采用两阶段工艺,一方面可以减少菌体培养阶段的设备规模,节省大型发酵罐在发酵过程中的功率消耗和能量消耗,另一方面可以提高细胞培养和聚苹合成的生产强度,使生产过程达到节能降耗的目的。

主权项

一种高密度发酵生产聚苹果酸的方法，通过两阶段调控pH和溶氧，第一阶段使菌体大量生长；第二阶段改变pH和溶氧，使聚苹果酸大量合成积累，具体包括如下步骤：（1）将出菌株活化培养后，制得种子液；（2）将所得种子液以10%（v/v）的量接于5L发酵罐中进行发酵培养，根据菌体OD₆₀₀值对pH和溶氧进行调控：第一阶段发酵：当菌体OD₆₀₀＜0.7（种子干重小于15g/L）时，将溶氧降至55‑65%，与搅拌串联，使溶氧维持至50‑60%之间，同时用盐酸和氢氧化钠调控pH至6.0‑7.0；第二阶段发酵：当菌体OD₆₀₀≥0.7（种子干重大于或等于15g/L）时，将溶氧降至30‑35%之间，温度25℃，同时用盐酸和氢氧化钠调控pH至4.8‑5.2之间，发酵96‑120小时；所述盐酸浓度为3mol/L，氢氧化钠浓度为3mol/L；（3）每隔8小时取样记录测定各项指标：pH、溶氧、菌体干重、发酵液残糖、聚苹果酸产量。