[发明专利]乳基料中游离态手性氨基酸的检测方法有效

专利信息
申请号: 201310743057.6 申请日: 2013-12-27
公开(公告)号: CN103645266A 公开(公告)日: 2014-03-19
发明(设计)人: 游春苹;郭本恒;刘振民;吴正钧;任婧;杭锋 申请(专利权)人: 光明乳业股份有限公司
主分类号: G01N30/06 分类号: G01N30/06;G01N30/88
代理公司: 上海弼兴律师事务所 31283 代理人: 朱水平;钟华
地址: 201103 *** 国省代码: 上海;31
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摘要: 发明公开了乳基料中游离态手性氨基酸的检测方法。其包括下述步骤:(1)制备待测样品:将乳基料去除脂肪和蛋白质并提取游离态氨基酸,得到待测样品;(2)衍生:将标准氨基酸和步骤(1)的待测样品分别进行衍生,衍生的条件如下:采用N-异丁酰基-L-半胱氨酸与邻苯二甲醛联合衍生,内标物为L-高精氨酸;(3)分离检测:采用高效液相色谱-荧光检测方法分离检测氨基酸,将待测样品的色谱图与标准氨基酸的色谱图比较,即可。本发明的检测方法采用高效液相色谱分离结合柱前手性试剂衍生和荧光检测法,检测限大大降低,能提高检测的分辨率和灵敏度,可以对乳基料中氨基酸组分进行手性构型的定性和定量分析。
搜索关键词: 乳基料中 游离态 手性 氨基酸 检测 方法
【主权项】:
一种乳基料中游离态手性氨基酸的检测方法,其包括下述步骤:(1)制备待测样品:将乳基料去除脂肪和蛋白质并提取游离态氨基酸,得到待测样品;(2)衍生:将标准氨基酸和步骤(1)的待测样品分别进行衍生,衍生的条件如下:采用N‑异丁酰基‑L‑半胱氨酸与邻苯二甲醛联合衍生,内标物为L‑高精氨酸;(3)分离检测:采用高效液相色谱‑荧光检测方法分离检测氨基酸,将待测样品的色谱图与标准氨基酸的色谱图比较,即可;其中,高效液相色谱的条件如下:流动相A为pH值为5.90~6.10、钠离子浓度为20~25mmol/L的乙酸‑乙酸钠缓冲液,流动相B为甲醇与乙腈的体积比为12:1的混合溶剂,以流动相A与流动相B按照下述体积比进行梯度洗脱:0min:(95~100)%A+(0~5)%B→15min:(84~88)%A+(12~16)%B→(45~55)min:(75~78)%A+(22~25)%B→90min:(30~46)%A+(54~70)%B→95min:(30~46)%A+(54~70)%B;流速为0.6~1mL/min。
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