[发明专利]乳基料中游离态手性氨基酸的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品领域，尤其涉及乳基料中游离态手性氨基酸的检测方法。

背景技术

近年来，乳制品食品安全事件引起社会广泛关注，由乳制品质量缺陷引发的食源性疾病明显增多，使得乳制品的质量安全问题受到广泛重视。食品科技的发展在丰富人类食品消费的同时，也给乳制品生产带来了安全问题。为了加强乳制品质量监管，《食品安全法》、《乳品质量安全监督管理条例》，《企业生产乳制品许可条件审查细则（2010版）》、《企业生产婴幼儿配方奶粉许可条件审查细则（2010版）》等法规相继出台，乳制品行业迫切需要更多的整体解决方案以满足日益增加的检测需求。众多的检测需求以及法规需求，同时也给乳制品分析实验室带来了如何细化完善检测指标、提高检测准确度灵敏度、提高实验室效率和降低分析成本的难题。

由于乳蛋白的氨基酸组成与人体需要颇为接近，因此被誉为“理想蛋白质”。牛乳中不仅蛋白质含量高，而且富含多种生物活性成分以及人体所需的各种氨基酸等。氨基酸是构成蛋白质的基本单位，它参与生物体内的新陈代谢和生理过程。不同的氨基酸比例、排列方式组成不同类别的蛋白质，它们在维持机体组织生长、更新、参与各种化学反应、提供生理活动所需要的热能等方面发挥着重要作用。游离氨基酸是人体可直接吸收的营养成分，它的含量和成分能够部分地反映出食品的营养价值。

组成人体内生命物质的20种基本氨基酸，除甘氨酸外都有两种互成镜像的L型和D型结构。动物实验表明D-氨基酸可能阻断一些重要生理物质的合成，还能抑制动物的生长，D-氨基酸构成的蛋白质多肽通常不被或缓慢地被肽酶水解；肝、肾中的D-氨基酸氧化酶能使D-氨基酸脱氨转化从而消除其毒性。研究表明人体内的D-氨基酸多与老龄化组织如白内障晶体浑浊、早老痴呆患者脑白质和灰质、某些肾脏疾病有关。人体内D-氨基酸的来源一方面是体内胃肠道细菌本身含有以及L-氨基酸消旋化形成，另一方面是通过摄取体外的药物、食物带入。而目前已知可能含有D-氨基酸的食物包括海带、一些昆虫、海洋动物、苹果和梨等天然食物，以及生物处理的乳制品、饮料、调味品、腌制品、加工肠、酱菜等加工食品。目前，食品中的手性氨基酸的分析研究还很少，更不属于食品安全的常规检测项目。由此，D-氨基酸对食品的安全性有待深入研究，食物中氨基酸水平以及D-氨基酸水平的监测将可能成为食品营养学及食品安全领域的一个重要方面。

牛乳中含有少量的D-氨基酸是正常现象，如部分种类的D-氨基酸含量较高可能与细菌引起的乳房炎有一定关系，并且在一定时间范围内，D-氨基酸含量会随着牛乳存储期的延长而增加。因此，D-氨基酸含量可能可以作为乳制品细菌污染程度或货架期的一个指标。此外据报道健康牛初乳中D-氨基酸的含量较高，大约可达健康牛非初乳的5倍。

针对氨基酸检测，现有的氨基酸测定方法，多数使用茚三酮染色或衍生，采用分光光度计或氨基酸分析仪进行氨基酸的分析，也有部分采用高效液相色谱仪，但也需要使用特殊的离子交换色谱柱。现行国家标准GB/T5009.124-2003《食品中氨基酸的测定》和GB/T18246-2000《饲料中氨基酸的测定》均采用全自动氨基酸分析仪；ISO13903:2005(E)《动物饲料-氨基酸含量的测定》使用氨基酸分析仪或高效液相色谱仪测定动物饲料中的17种氨基酸（不包括色氨酸）；AOAC官方方法994.12《饲料中氨基酸的测定-过甲酸氧化与焦亚硫酸钠-酸水解法》适用于用氨基酸分析仪测定16种氨基酸（包括蛋氨酸和胱氨酸，不包括酪氨酸和色氨酸）。以上标准方法均不涉及氨基酸手性异构体的测定。