[发明专利]利用农杆菌获得中国主栽转基因小麦的方法及其专用培养基

摘要

本发明公开了一种利用农杆菌获得中国主栽转基因小麦的方法及其专用培养基。本发明提供了用于制备转基因植物的试剂盒，包括侵染液、共培养培养基、愈伤诱导培养基、分化培养基和生根培养基。本发明还提供了一种制备转基因植物的方法。本发明的实验证明，本发明针对中国主栽的小麦品种，优化了植物组培的培养基，本发明利用侵染液和一组培养基，且选择未成熟的胚部分作为外植体，利用这些进行了转基因小麦的制备，提高了中国主栽的小麦品种的基因转化效率和频率，转化流程丰富、操作规范，大大提高了小麦转化产业化的发展，尤其是促进了我国主栽品种小麦的转化产业的发展。

主权项

用于制备转基因植物的试剂盒，包括侵染液、共培养培养基、愈伤诱导培养基、分化培养基和生根培养基；所述侵染液由1/10MS基本培养基、乙磺酸、2，4‑二氯苯氧乙酸、麦芽糖和水组成，所述乙磺酸在所述侵染液中的终浓度为0.1g/L，所述2，4‑二氯苯氧乙酸在所述侵染液中的终浓度为5.0mg/L、所述麦芽糖在所述侵染液中的终浓度为30g/L；所述共培养培养基由1/10MS基本培养基、乙磺酸、脯氨酸、2，4‑二氯苯氧乙酸、麦芽糖、抗坏血酸、乙酰丁香酮、凝固剂和水组成；其中，所述乙磺酸在所述共培养培养基中的终浓度为0.1g/L，所述脯氨酸在所述共培养培养基中的终浓度为0.69g/L，所述2，4‑二氯苯氧乙酸在所述共培养培养基中的终浓度为5.0mg/L，所述麦芽糖在所述共培养培养基中的终浓度为30g/L,所述凝固剂在所述共培养培养基中的终浓度为10g/L，所述抗坏血酸在所述共培养培养基中的终浓度为100mg/L，所述乙酰丁香酮在所述共培养培养基中的终浓度为200μM。所述愈伤诱导培养基由MS基本培养基、硝酸铵、五水硫酸铜、乙磺酸、2，4‑二氯苯氧乙酸、水解酪蛋白、脯氨酸、麦芽糖、凝固剂、抗坏血酸、特美汀和水组成，其中，所述硝酸铵在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为2.4g/L，所述五水硫酸铜在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为1.25mg/L，所述乙磺酸在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为1.95g/L，所述2，4‑二氯苯氧乙酸在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为2.0mg/L，所述水解酪蛋白在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为1.0g/L，所述脯氨酸终浓度在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为0.69g/L，所述麦芽糖在所述愈伤诱导培养基中的终浓度40g/L，所述凝固剂在所述愈伤诱导培养基中的终浓度8g/L，所述抗坏血酸在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为100mg/L，所述特美汀在所述愈伤诱导培养基中的终浓度为200mg/L；所述分化培养基由MS基本培养基、五水硫酸铜、乙磺酸、谷氨酰胺、蔗糖、凝固剂、噻苯隆、草铵膦、特美汀和水组成，其中，所述五水硫酸铜在所述分化培养基中的终浓度为1.25mg/L，所述乙磺酸在所述分化培养基中的终浓度为1.95g/L，所述谷氨酰胺在所述分化培养基中的终浓度为0.75g/L，所述蔗糖在所述分化培养基中的终浓度为30g/L的，所述凝固剂在所述分化培养基中的终浓度为终浓度为3g/L，所述噻苯隆在所述分化培养基中的终浓度为0.5mg/L，所述草铵膦在所述分化培养基中的终浓度为5mg/L，所述特美汀在所述分化培养基中的终浓度为终浓度为200mg/L；所述生根培养基由1/2的MS基本培养基、乙磺酸、α‑萘乙酸、蔗糖、凝固剂、草铵膦和特美汀组成，其中，所述乙磺酸在所述生根培养基中的终浓度为0.5g/L，所述α‑萘乙酸在所述生根培养基中的终浓度为0.5mg/L，所述蔗糖在所述生根培养基中的终浓度为30g/L，所述凝固剂在所述生根培养基中的终浓度为3g/L，所述草铵膦在所述生根培养基中的终浓度为5mg/L，所述特美汀在所述生根培养基中的终浓度为200mg/L。