[发明专利]质谱仪鉴定血清中游离DNA的方法、试剂盒及其应用

摘要

本发明属于生物技术领域，涉及一种质谱仪鉴定血清中游离DNA的方法、试剂盒及其应用。所述方法包括PCR反应、PCR产物纯化、单碱基延伸、延伸产物纯化、质谱仪检测的步骤；所述试剂盒包括PCR反应试剂、纯化试剂及单碱基延伸反应试剂。本发明相比于现有技术具有灵敏度高、特异性强、简便安全、速度快、高通量、更节约时间等优点。

主权项

一种质谱仪鉴定血清中游离DNA的方法，包括以下步骤： （1）PCR反应：游离DNA中Kras基因进行PCR扩增，得到含Kras基因12密码子和13密码子区域的PCR产物；所述PCR扩增是用序列为SEQ ID No：1和SEQ ID No：2的PCR引物进行扩增；（2）PCR产物纯化：对步骤（1）得到的PCR产物进行纯化；（3）单碱基延伸：使用iPLEX Pro酶、ddATPs、ddCTPs、ddTTPs和特异性的延伸引物，对步骤（2）得到的纯化后PCR产物进行多重单碱基延伸，延伸引物在对应的SNP位点处延伸一个核苷酸，该核苷酸与SNP位点处的基因型互补配对；所述特异性的延伸引物为SEQ ID No：3、SEQ ID No：4、SEQ ID No：5中的任一条或几条；（4）延伸产物纯化：对步骤（3）得到的延伸产物进行纯化；（5）质谱仪检测：将步骤（4）得到的纯化产物点在含有基质的靶片上，放入质谱仪进行检测。