[发明专利]一种用于猪病诊断的三重连接探针扩增检测方法

摘要

本发明涉及一种用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒以及猪伪狂犬病毒的靶核酸的探针和引物，三重同步核酸定性检测试剂，三重连接探针扩增检测方法。本发明针对三种病毒核酸的特异性探针杂交后的连接产物进行PCR扩增，能够同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒以及猪伪狂犬病毒等三种混合感染的常见病原，这种多重验证结点集成一体化设计极大提高了检测结果的特异性与可靠性，本发明对原有的多重连接探针扩增检测技术的关键参数进行了调整，使检测效率显著提高的同时也降低了检测成本。

主权项

一种用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒以及猪伪狂犬病毒的靶核酸的探针和引物，其特征在于，包括如下的序列组： 1）针对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的探针 左翼探针Probe105L：5’TGGTTCGCTTAGGGTTGGTTGGCGCTACTCTTGTACCAGATA 3’ 右翼探针Probe105R：5’TACCAACTTCCTTCTGGACACTGTGCCAGCAAGATCCAATCTC TCTGCACGATCCAATACCAC 3’ 2）针对猪瘟病毒E2基因的探针 左翼探针Probe125L：5’TGGTTCGCTTAGGGTTGGTTTGGCAGGTTCCTTTAAAGTCACA 3’ 右翼探针Probe125R：5’GCACTTAATGTGGTCAGTAGGAGTGCCAGCAAGATCCAATCTGTGC CAGCAAGATCCAATCTCTCTGCACGATCCAATACCAC 3’ 3）针对猪伪狂犬病毒TK基因的探针 左翼探针Probe150L：5’TGGTTCGCTTAGGGTTGGTTTGCCAGCAAGATCCAATCTCCTG CGCAACGTCTACGCCAT 3’ 右翼探针Probe150R：5’GCTGGTCAACACGTCGCGCTACCTGAGGTGCCAGCAAGATCCAAT CTGTGCCAGCAAGATCCAATCTGTCTCTGCACGATCCAATACCAC 3’ 4）通用引物 正向引物UP1：5′TGGTTCGCTTAGGGTTGGTT 3′ 反向引物UP2：5′GTGGTATTGGATCGTGCAGAGA 3′。