[发明专利]一种利用絮凝作用延长细菌发酵生产丁二酸周期的方法

摘要

一种利用絮凝作用延长细菌发酵生产丁二酸周期的方法，它是：在一次厌氧发酵结束时，培养基中一次性添加海藻酸钠、壳聚糖或聚乙烯亚胺中的一种或者多种，其使用总量在0.25～0.75g/L之间，絮凝回收菌体细胞，并且絮凝的细胞仍然具有活性，可以再次转入新鲜培养基中厌氧发酵生产丁二酸，有效延迟了有氧培养获得的细胞的总的产酸周期。

主权项

一种利用絮凝作用延长细菌发酵生产丁二酸周期的方法，其特征是包括下列步骤：（1）菌种活化：从甘油冻存管中取少量菌液，在LB平板上划线后放置于37℃下培养12h；（2）种子液制备：从LB平板上取单菌落，接种于LB液体培养基，在37℃，200r/min条件下摇瓶培养6～8h，至菌体密度（OD₆₀₀）值在0.6～0.8之间；（3）发酵产丁二酸过程：按3～10%的接种量接种发酵培养基，先同空气有氧培养至菌体密度（OD₆₀₀）值在30～40之间，再以0.1～0.2vvm的通气流量连续通二氧化碳气体维持发酵罐中厌氧环境，并以碳酸钠作为酸中和剂控制pH值在6.4～7.2，控制温度在35～40℃；（4）在一次厌氧发酵结束时，培养基中一次性添加絮凝剂，其使用总量在0.25～0.75g/L之间，然后停止发酵罐的搅拌，使发酵液静置5～10分钟后，用泵从预先插入发酵罐四分之三液位处的管子将发酵液抽出四分之三发酵液，发酵液中的细胞此时绝大多数沉在发酵罐的底部，随后补入相同体积的新鲜培养基，开启搅拌继续发酵。