[发明专利]一种骨髓间充质干细胞在体外向成骨细胞分化的诱导方法及诱导培养基

摘要

本发明提供了一种骨髓间充质干细胞在体外向成骨细胞分化的诱导方法及诱导培养基，本发明诱导培养基组成为：地塞米松1×10-8mol/L，抗坏血酸50μmol/L，β-甘油磷酸钠10mmol/L，溶剂为骨片完全培养基的上清液，其成分为：胎牛血清10%，青霉素100U/mL，链霉素100mg/L，DMEM培养液和F12培养液的混合物以及骨片培养过程中骨细胞分泌的多种生长因子。本发明通过更换细胞培养液和细胞贴壁传代的方法纯化小鼠骨髓间充质干细胞，取获得的第1代细胞进行诱导，以培养72-96小时的骨片完全培养基的上清液为成骨细胞分化诱导剂的溶剂，明显提高了骨髓间充质干细胞的体外成骨分化效率。

主权项

一种骨髓间充质干细胞在体外向成骨细胞分化的诱导方法，其特征在于：所述方法包括：获取骨髓细胞制成单细胞悬液接种于培养皿中进行贴壁培养，培养3~5小时后首次更换细胞培养基，此后每隔12小时再次更换细胞培养基，直到接种后72小时，然后再每隔3天更换细胞培养基继续培养，直到细胞长至80%~90%融合，以胰酶消化，消化时间不超过2分钟，获得纯化骨髓间充质干细胞；取小鼠的股骨和胫骨进行骨片培养，培养至72~96小时有细胞爬出时，收集骨片培养的上清液；取纯化骨髓间充质干细胞进行体外成骨细胞的诱导分化，每3天更换一次诱导培养基，至诱导21天进行染色鉴定；所述诱导培养基的终浓度组成如下：地塞米松1×10‑8 mol/L，抗坏血酸50μmol/L，β‑甘油磷酸钠10 mmol/L，溶剂为所述骨片培养72~96小时的上清液。