[发明专利]一种pH稳定比酶活高的重组碱性果胶酶及其构建方法在审
| 申请号： | 201310453358.5 | 申请日： | 2013-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN103881996A | 公开（公告）日： | 2014-06-25 |
| 发明（设计）人： | 张桂敏;徐婷;宋江宁;马延和 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12R1/19 |
| 代理公司： | 武汉金堂专利事务所 42212 | 代理人： | 丁齐旭 |
| 地址： | 430062 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种pH稳定性好、比酶活高的碱性果胶酶和编码基因及其构建方法。采用定点诱变技术将枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis168的碱性果胶酶编码基因pel168进行诱变，将457位的鸟嘌呤G变成胸腺嘧啶T，使得编码的果胶酶的成熟肽第132位的缬氨酸V突变成苯丙氨酸F，突变基因pel168V132F在大肠杆菌RossetBlue(DE3)进行表达，经诱导表达、破菌、纯化，再将纯化的酶进行酶活测定，得到的果胶酶突变体PEL168V132F比原始的果胶酶PEL168在pH为3、5、6时，相对活性有显著提高，同时比酶活也是原始酶的2.25倍。这为碱性果胶酶的广泛应用奠定了良好的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 ph 稳定 酶活高 重组 碱性 果胶酶 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种pH稳定比酶活高的重组碱性果胶酶，其特征在于在GenBank 收录号AL009126中含有的果胶酶基因pel168，对应果胶酶PEL168的氨基酸序列收录号为CAB12585.1，设计点突变引物（FP和RP）进行定点诱变，将公布的基因的457位的鸟嘌呤G变成胸腺嘧啶T，获得pel168V132F，使得其编码氨基酸序列成熟肽的第132位的缬氨酸V（GTC）突变成苯丙氨酸F(TTC)，获得重组碱性果胶酶PEL168V132F。
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