[发明专利]基于氯过氧化物酶法检测亚硝酸盐含量的方法

摘要

一种基于氯过氧化物酶法检测亚硝酸盐含量的方法，利用NO2-的存在能够提高氯过氧化物酶对吲哚的氧化活性，并在一定浓度范围内与氯过氧化物酶的氧化活性成线性关系这一特性，来定量检测NO2-的浓度。本发明方法操作简单，加标回收率95%～115.8%，检出限为0.0048mmol/L，线性范围为0.005～0.055mmol/L，该方法准确、可靠，精密度高，检出限低，绿色环保，可检测的样品范围广泛，对食品安全评估具有一定意义。

主权项

一种基于氯过氧化物酶法检测亚硝酸盐含量的方法，其特征在于由下述步骤组成：（1）测定氯过氧化物酶的氧化活性将5μL8μmol/L的氯过氧化物酶水溶液、200μL2mmol/L的吲哚水溶液、100μL3mmol/L的双氧水溶液、695μL pH值为5的柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液加入1mL比色皿中，用紫外可见分光光度计在波长270nm处测定30s内其吸光度变化量，记为△A1270nm；（2）测定NO2‑存在时氯过氧化物酶的相对氧化活性将5μL8μmol/L的氯过氧化物酶水溶液、200μL2mmol/L的吲哚水溶液、100μL3mmol/L的双氧水溶液加入1mL比色皿中，再加入1mmol/L的NaNO2水溶液和pH值为5的柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液，保持混合液的总体积为1mL，混合液中NO2‑离子的浓度为0.005～0.055mmol/L，用紫外可见分光光度计在波长270nm处测定30s内其吸光度变化量，记为△A2270nm，按下述公式（1）计算氯过氧化物酶的相对氧化活性氯过氧化物酶的相对氧化活性=△A2270nm/△A1270nm   （1）（3）确定工作曲线及方程以NO2‑的浓度为横坐标，氯过氧化物酶的相对氧化活性为纵坐标，由计算机绘制工作曲线，并得出工作曲线的线性回归方程为y=1.0364+55.02x，式中y是氯过氧化物酶的相对氧化活性，x是NO2‑的浓度，相关系数为0.9975；（4）测定样品中亚硝酸盐含量将5μL8μmol/L的氯过氧化物酶水溶液、200μL2mmol/L的吲哚水溶液、100μL3mmol/L的双氧水溶液加入1mL比色皿中，再加入10～20μL样品浸出液和pH值为5的柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液，保持混合液的总体积为1mL，用紫外可见分光光度计在波长270nm处测定30s内其吸光度变化量，记为△A2270nm，按公式（1）计算氯过氧化物酶的相对氧化活性，将此值代入线性回归方程，计算样品中亚硝酸盐的含量。