[发明专利]基于氯过氧化物酶法检测亚硝酸盐含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全技术领域，具体涉及一种基于氯过氧化物酶与NO₂^-之间的相互作用来检测食品中亚硝酸盐含量的方法。

背景技术

亚硝酸盐对人体有极大危害，它可与人体血红蛋白反应，使之失去载氧功能，造成高铁血红蛋白症；另一方面，亚硝酸盐还可在胃腔中形成强致癌物亚硝胺，可诱发有机体突变，对神经和肾脏有害，具有致畸性和致癌性。亚硝酸盐进入人体的途径主要是通过饮食摄入，除了饮用水、蔬菜、渍酸菜、隔夜炒菜等饮食含有一定量的亚硝酸盐之外，由于它具有抑制肉毒梭菌产生肉毒毒素的作用，赋予肉制品特有的颜色、风味和质地的作用，还被广泛应用于肉制品的生产过程中。

随着近代分析化学的发展和新仪器的应用，亚硝酸盐的测定方法已经相当多样和完善，选择性和灵敏度都在不断提高。其中气相色谱-热能分析法是检测的标准方法，但热能分析仪价格昂贵，应用范围窄，适应性不强，一般实验室都没有配备；同时待测定的样品中目标组分含量低，而其他的成分却十分复杂，而且数量大，干扰作用较多。因此建立方便、易行、选择性好的检测方法非常必要。

氯过氧化物酶（CPO）是从海洋真菌Caldariomyces fumago中分离出来的一种血红素过氧化物酶，其具有多种多样的催化活性，因而被认为是过氧化物酶家族中应用最广泛的酶。目前基于过氧化物酶的亚硝酸盐检测体系还未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种基于氯过氧化物酶法检测食品中亚硝酸盐含量的方法，该方法操作简单、选择性好、适用范围广泛。

解决上述技术问题所采用的技术方案是由下述步骤组成：

1、测定氯过氧化物酶的氧化活性

将5μL8μmol/L的氯过氧化物酶水溶液、200μL2mmol/L的吲哚水溶液、100μL3mmol/L的双氧水溶液、695μL pH值为5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入1mL比色皿中，用紫外可见分光光度计在波长270nm处测定30s内其吸光度变化量，记为△A1_270nm。

2、测定NO₂^-存在时氯过氧化物酶的相对氧化活性

将5μL8μmol/L的氯过氧化物酶水溶液、200μL2mmol/L的吲哚水溶液、100μL3mmol/L的双氧水溶液加入1mL比色皿中，再加入1mmol/L的NaNO₂水溶液和pH值为5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，保持混合液的总体积为1mL，混合液中NO₂^-离子的浓度为0.005～0.055mmol/L，用紫外可见分光光度计在波长270nm处测定30s内其吸光度变化量，记为△A2_270nm，按下述公式（1）计算氯过氧化物酶的相对氧化活性

氯过氧化物酶的相对氧化活性=△A2_270nm/△A1_270nm   （1）

3、确定工作曲线及方程

以NO₂^-的浓度为横坐标，氯过氧化物酶的相对氧化活性为纵坐标，由计算机绘制工作曲线，并得出工作曲线的线性回归方程为y=1.0364+55.02x，式中y是氯过氧化物酶的相对氧化活性，x是NO₂^-的浓度，相关系数为0.9975。

4、测定样品中亚硝酸盐含量

将5μL8μmol/L的氯过氧化物酶水溶液、200μL2mmol/L的吲哚水溶液、100μL3mmol/L的双氧水溶液加入1mL比色皿中，再加入10～20μL样品浸出液和pH值为5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，保持混合液的总体积为1mL，用紫外可见分光光度计在波长270nm处测定30s内其吸光度变化量，记为△A2_270nm，按公式（1）计算氯过氧化物酶的相对氧化活性，将此值代入线性回归方程，计算样品中亚硝酸盐的含量。

本发明的检测对象是生活中常见的腌辣椒、腌芥菜、榨菜和火腿肠，本发明所采用的的酶法检测，操作简单、选择性好、适用范围广泛。

附图说明

图1是实施例1绘制的工作曲线。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不仅限于这些实施例。

实施例1

1、测定氯过氧化物酶的氧化活性