[发明专利]基于氯过氧化物酶法检测亚硝酸盐含量的方法有效
| 申请号： | 201310442916.8 | 申请日： | 2013-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN103454237A | 公开（公告）日： | 2013-12-18 |
| 发明（设计）人： | 蒋育澄;焦瑞娟;高强;胡满成;李淑妮;翟全国 | 申请（专利权）人： | 陕西师范大学 |
| 主分类号： | G01N21/33 | 分类号： | G01N21/33 |
| 代理公司： | 西安永生专利代理有限责任公司 61201 | 代理人： | 高雪霞 |
| 地址： | 710062 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 过氧化物 检测 亚硝酸盐 含量 方法 | ||
1.一种基于氯过氧化物酶法检测亚硝酸盐含量的方法，其特征在于由下述步骤组成：
（1）测定氯过氧化物酶的氧化活性
将5μL8μmol/L的氯过氧化物酶水溶液、200μL2mmol/L的吲哚水溶液、100μL3mmol/L的双氧水溶液、695μL pH值为5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液加入1mL比色皿中，用紫外可见分光光度计在波长270nm处测定30s内其吸光度变化量，记为△A1270nm；
（2）测定NO2-存在时氯过氧化物酶的相对氧化活性
将5μL8μmol/L的氯过氧化物酶水溶液、200μL2mmol/L的吲哚水溶液、100μL3mmol/L的双氧水溶液加入1mL比色皿中，再加入1mmol/L的NaNO2水溶液和pH值为5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，保持混合液的总体积为1mL，混合液中NO2-离子的浓度为0.005～0.055mmol/L，用紫外可见分光光度计在波长270nm处测定30s内其吸光度变化量，记为△A2270nm，按下述公式（1）计算氯过氧化物酶的相对氧化活性
氯过氧化物酶的相对氧化活性=△A2270nm/△A1270nm （1）
（3）确定工作曲线及方程
以NO2-的浓度为横坐标，氯过氧化物酶的相对氧化活性为纵坐标，由计算机绘制工作曲线，并得出工作曲线的线性回归方程为y=1.0364+55.02x，式中y是氯过氧化物酶的相对氧化活性，x是NO2-的浓度，相关系数为0.9975；
（4）测定样品中亚硝酸盐含量
将5μL8μmol/L的氯过氧化物酶水溶液、200μL2mmol/L的吲哚水溶液、100μL3mmol/L的双氧水溶液加入1mL比色皿中，再加入10～20μL样品浸出液和pH值为5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，保持混合液的总体积为1mL，用紫外可见分光光度计在波长270nm处测定30s内其吸光度变化量，记为△A2270nm，按公式（1）计算氯过氧化物酶的相对氧化活性，将此值代入线性回归方程，计算样品中亚硝酸盐的含量。
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