[发明专利]六味地黄制剂中葡萄糖二酸盐及葡萄糖二酸1,4内酯含量测定方法

摘要

本发明属于药物分析领域，涉及中成药六味地黄系列制剂中两种新发现药理活性成分葡萄糖二酸盐及葡萄糖二酸1，4内酯含量测定方法。本发明利用Na2CO3溶液或60%甲醇溶液提取六味地黄制剂中的葡萄糖二酸（盐）及（或）葡萄糖二酸1，4内酯。采用亲水色谱HPLC-HILIC-UV/ELSD/MS等分离检测技术对这两种化合物进行定量分析。本发明首次建立了六味地黄制剂中葡萄糖二酸盐及其内酯的含量测定方法,为六味地黄系列制剂质量控制提供了新的思路和方法。

主权项

六味地黄制剂中葡萄糖二酸盐及葡萄糖二酸1,4内酯含量测定方法，其特征在于包括：     1）葡萄糖二酸盐和葡萄糖二酸1，4内酯标准溶液的制备：分别精密称取葡萄糖二酸盐和葡萄糖二酸1，4内酯两种对照品40.0mg，定量转移至10.0mL容量瓶中，加水稀释到刻度，精密移取5.0mL至10.0mL容量瓶中，加80%乙腈稀释至刻度，配制成200.0ug/mL溶液，作为对照品母溶液；2）HPLC‑HILIC‑UV/ELSD法测定六味地黄丸中总葡萄糖二酸盐的含量：取六味地黄丸，粉碎，精密称取500mg，加入4.0mL 2‑5%Na2CO3溶液超声20min，离心，沉淀再用等体积上述溶液提取一次，离心，合并上清液；采用C18 SPE小柱萃取，收集5%甲醇洗脱部分，用高速真空离心，干燥机55℃干燥，干燥物准确加入1.0mL 80%乙腈，10，000转离心10min取上清液进行HPLC‑HILIC‑UV/ELSD分析，以标准曲线法对葡萄糖二酸盐进行定量；HPLC‑HILIC‑UV法色谱条件：色谱柱为ZIC‑HILIC 长250mm,内径4.6mm, 颗粒度5um；以乙腈‑5mM磷酸二氢铵为流动相，两者体积比为78:22恒度洗脱；流速0.8mL/min；检测波长205nm；进样10ul，柱温30℃；HPLC‑HILIC‑ELSD法色谱条件：色谱柱为ZIC‑HILIC ZIC‑HILIC 长250mm,内径4.6mm, 颗粒度5um；以乙腈A相‑0.02%醋酸胺B相为流动相梯度洗脱：0‑5min A相80%，5‑25min A相80%‑75%，25‑30min A相为75%‑50%，30‑35min A相为50%‑80%；流速0.8mL/min；进样10ul，漂移管温度60℃ 气流1.2L/min；3）六味地黄丸中葡萄糖二酸1,4内酯含量测定：取六味地黄丸，粉碎，精密称取500mg，加4.0 mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,000转离心10min取上清液，残渣继续加4.0mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,,000转离心10min取上清液，合并上清液，14,000转离心后适当稀释进样UPLC‑MS/MS分析；色谱条件：Waters BEH C18色谱柱，长50mm,内径1.0 mm,粒径1.7um，柱温：40℃；流动相：A相为10mM甲酸，B相为乙腈；流速0.4mL/min；质谱条件：电喷雾负离子源ESI‑，电压2000V， source temp 100℃, 锥孔电压15V，脱溶剂气温度300℃，锥孔气和脱溶剂气流量分别为50和600L/min；全扫描模式50~1200amu；二级碰撞能量15V；分子离子峰191的碎片峰85的强度用于葡萄糖1.4‑内酯的定量；以标准曲线法对葡萄糖二酸1，4内酯进行定量；4）六味地黄丸中葡萄糖二酸盐及葡萄糖二酸1,4内酯同时检测：取六味地黄丸，粉碎，精密称取500mg，加4.0 mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,000转离心10min取上清液，残渣继续加4.0mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,,000转离心10min取上清液，合并上清液，14,000转离心后适当稀释进样HPLC‑LILIC‑UV分析；HPLC‑HILIC‑UV法色谱条件：色谱柱为ZIC‑HILIC 长250mm,内径4.6mm, 颗粒度5um；以乙腈A相‑5mM磷酸二氢铵+1.0%磷酸B相为流动相，流动相梯度洗脱程序：0‑3min A相83%，3‑15min A相83‑65%，15‑18min A相65%，18‑20min A相65‑83%，20‑30min A相83%；检测波长205nm；进样10ul，柱温30℃；以标准曲线法对葡萄糖二酸盐和葡萄糖二酸1，4内酯进行同时定量。