[发明专利]六味地黄制剂中葡萄糖二酸盐及葡萄糖二酸1,4内酯含量测定方法

权利要求书

1.六味地黄制剂中葡萄糖二酸盐及葡萄糖二酸1,4内酯含量测定方法，其特征在于包括：     1）葡萄糖二酸盐和葡萄糖二酸1，4内酯标准溶液的制备：分别精密称取葡萄糖二酸盐和葡萄糖二酸1，4内酯两种对照品40.0mg，定量转移至10.0mL容量瓶中，加水稀释到刻度，精密移取5.0mL至10.0mL容量瓶中，加80%乙腈稀释至刻度，配制成200.0ug/mL溶液，作为对照品母溶液；

2）HPLC-HILIC-UV/ELSD法测定六味地黄丸中总葡萄糖二酸盐的含量：

取六味地黄丸，粉碎，精密称取500mg，加入4.0mL 2-5%Na₂CO₃溶液超声20min，离心，沉淀再用等体积上述溶液提取一次，离心，合并上清液；采用C18 SPE小柱萃取，收集5%甲醇洗脱部分，用高速真空离心，干燥机55℃干燥，干燥物准确加入1.0mL 80%乙腈，10，000转离心10min取上清液进行HPLC-HILIC-UV/ELSD分析，以标准曲线法对葡萄糖二酸盐进行定量；HPLC-HILIC-UV法色谱条件：色谱柱为ZIC-HILIC 长250mm,内径4.6mm, 颗粒度5um；以乙腈-5mM磷酸二氢铵为流动相，两者体积比为78:22恒度洗脱；流速0.8mL/min；检测波长205nm；进样10ul，柱温30℃；HPLC-HILIC-ELSD法色谱条件：色谱柱为ZIC-HILIC ZIC-HILIC 长250mm,内径4.6mm, 颗粒度5um；以乙腈A相-0.02%醋酸胺B相为流动相梯度洗脱：0-5min A相80%，5-25min A相80%-75%，25-30min A相为75%-50%，30-35min A相为50%-80%；流速0.8mL/min；进样10ul，漂移管温度60℃ 气流1.2L/min；

3）六味地黄丸中葡萄糖二酸1,4内酯含量测定：

取六味地黄丸，粉碎，精密称取500mg，加4.0 mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,000转离心10min取上清液，残渣继续加4.0mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,,000转离心10min取上清液，合并上清液，14,000转离心后适当稀释进样UPLC-MS/MS分析；色谱条件：Waters BEH C18色谱柱，长50mm,内径1.0 mm,粒径1.7um，柱温：40℃；流动相：A相为10mM甲酸，B相为乙腈；流速0.4mL/min；质谱条件：电喷雾负离子源ESI-，电压2000V， source temp 100℃, 锥孔电压15V，脱溶剂气温度300℃，锥孔气和脱溶剂气流量分别为50和600L/min；全扫描模式50~1200amu；二级碰撞能量15V；分子离子峰191的碎片峰85的强度用于葡萄糖1.4-内酯的定量；以标准曲线法对葡萄糖二酸1，4内酯进行定量；

4）六味地黄丸中葡萄糖二酸盐及葡萄糖二酸1,4内酯同时检测：

取六味地黄丸，粉碎，精密称取500mg，加4.0 mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,000转离心10min取上清液，残渣继续加4.0mL 60%甲醇溶液，超声20min，5,,000转离心10min取上清液，合并上清液，14,000转离心后适当稀释进样HPLC-LILIC-UV分析；HPLC-HILIC-UV法色谱条件：色谱柱为ZIC-HILIC 长250mm,内径4.6mm, 颗粒度5um；以乙腈A相-5mM磷酸二氢铵+1.0%磷酸B相为流动相，流动相梯度洗脱程序：0-3min A相83%，3-15min A相83-65%，15-18min A相65%，18-20min A相65-83%，20-30min A相83%；检测波长205nm；进样10ul，柱温30℃；以标准曲线法对葡萄糖二酸盐和葡萄糖二酸1，4内酯进行同时定量。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于所述Na₂CO₃溶液浓度为2.0%。