[发明专利]一种检测土壤谷氨酸脱氢酶活性的分析方法

摘要

本发明涉及一种检测土壤中谷氨酸脱氢酶活性的分析方法：1）称取土壤使用氯仿进行熏蒸于试管中，向试管中加入三羟甲基氨基甲烷缓冲液振荡，将酶提取到此溶液中；提取后离心；离心后将每一个试管的上清液加入到2个丙烯酸比色皿中，向其中一个比色皿中NH₄⁺溶液，酮戊二酸溶液和0.08-0.12ml NADPH溶液；另外一个比色皿作为对照，酮戊二酸用等体积的三羟甲基氨基甲烷缓冲液代替；盖上盖子，混匀，置于室温条件下比色；根据得到的吸光度值和标准曲线的斜率计算出对应的NADPH浓度。1）本发明首次探明土壤中谷氨酸脱氢酶的测定方法；2）减少对设备要求的依赖性；3）方法准确度高，易操作；4）结果稳定可靠，重现性好。

主权项

一种检测土壤中谷氨酸脱氢酶活性的分析方法，其特征在于：1）称取过2‑4mm筛的土壤风干样品使用氯仿进行熏蒸；2）称取熏蒸后的土壤每份1克于n（n≥6）支硼硅酸盐试管中，向试管中加入2.2‑2.8ml三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.6）振荡50‑70分，将酶提取到此溶液中；3）提取后样品在13000‑16000转/分条件下离心1‑3分钟；4）离心后将每一个试管的上清液加入到2个丙烯酸比色皿中，每个取0.5‑0.9ml；5）向其中一个比色皿中加入0.08‑0.12ml NH₄⁺溶液（100mM），0.08‑0.12ml酮戊二酸溶液（60mM）和0.08‑0.12ml NADPH溶液（1.5mM）；6）另外一个比色皿作为对照，酮戊二酸用等体积的三羟甲基氨基甲烷缓冲液代替；7）比色皿盖上盖子，混匀，置于室温条件下，在340nm条件下比色，3小时内比色3次，每小时1次，分别得到吸光度值A1,A2和A3；8）根据得到的吸光度值和标准曲线的斜率b计算出对应的NADPH浓度，设定浓度为S，S=A*b；9）计算出NADPH浓度在单位时间内的减少量，设定减少量为S_d，S_d=[(S1‑S2)+(S2‑S3)]/2；10）谷氨酸脱氢酶活性用单位时间NADPH浓度的减少量来表示，单位μmol NADPH kg^‑1干土h^‑1)。