[发明专利]一种检测土壤谷氨酸脱氢酶活性的分析方法

权利要求书

1.一种检测土壤中谷氨酸脱氢酶活性的分析方法，其特征在于：

1）称取过2-4mm筛的土壤风干样品使用氯仿进行熏蒸；

2）称取熏蒸后的土壤每份1克于n（n≥6）支硼硅酸盐试管中，向试管中加入2.2-2.8ml三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.6）振荡50-70分，将酶提取到此溶液中；

3）提取后样品在13000-16000转/分条件下离心1-3分钟；

4）离心后将每一个试管的上清液加入到2个丙烯酸比色皿中，每个取0.5-0.9ml；

5）向其中一个比色皿中加入0.08-0.12ml NH₄⁺溶液（100mM），0.08-0.12ml酮戊二酸溶液（60mM）和0.08-0.12ml NADPH溶液（1.5mM）；

6）另外一个比色皿作为对照，酮戊二酸用等体积的三羟甲基氨基甲烷缓冲液代替；

7）比色皿盖上盖子，混匀，置于室温条件下，在340nm条件下比色，3小时内比色3次，每小时1次，分别得到吸光度值A1,A2和A3；

8）根据得到的吸光度值和标准曲线的斜率b计算出对应的NADPH浓度，设定浓度为S，S=A*b；

9）计算出NADPH浓度在单位时间内的减少量，设定减少量为S_d，S_d=[(S1-S2)+(S2-S3)]/2；

10）谷氨酸脱氢酶活性用单位时间NADPH浓度的减少量来表示，单位μmol NADPH kg^-1干土h^-1)。

2.按权利要求1所述分析方法，其特征在于：

标准曲线的制作：溶解1molNADPH于100ml三羟甲基氨基甲烷中得溶液A，分别吸取1,2,3,4,5ml溶液A用100ml三羟甲基氨基甲烷溶液溶解，得到浓度为10，20，30，40和50μmol/ml的B1～B5溶液，将B1～B5溶液在340nm条件下比色，根据得到的吸光度和样品浓度绘制标准曲线，得到斜率b。