[发明专利]一种人骨髓间充质干细胞体外培养扩增方法

摘要

本发明公开了一种人骨髓间充质干细胞体外培养扩增方法，通过将DMEM培养基作为基础培养基，并依次加入L-谷氨酰胺，维生素C，胰岛素，红细胞生成素，然后以氢氧化钠调节pH值，最后加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基作为基础，再将细胞进行培养。本发明可明显提高人骨髓间充质干细胞的扩增数量和细胞活性；同时保持生物学效应及多向分化潜能；增强细胞移植修复肌体组织细胞损伤的功效；可以及时有效地为科研和临床所用。

主权项

一种人骨髓间充质干细胞体外培养扩增方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1）将DMEM培养基作为基础培养基，并依次调整浓度加入100mg/L‑500mg/L的L‑谷氨酰胺、15mg/L‑150mg/L的维生素C、10mU/L‑20mU/L的胰岛素、10U/L‑50U/L的红细胞生成素和5μg/L‑255μg/L的血管内皮生长因子等，然后以氢氧化钠调节PH值，最后加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基；步骤2）收集人骨髓间充质干细胞原代细胞，制成细胞悬液，计细胞数，调整细胞密度后加入培养基，并接种至培养皿中；步骤3）将培养皿置于37℃、5%的CO2、95%饱和湿度的CO2培养箱中培养；步骤4）使用倒置相差显微镜观察细胞贴壁及生长状况，在首次传代后24小时首次换液，并在换液后每48小时换液1次；步骤5）当细胞达80%至90%融合时，使用PBS洗掉非贴壁细胞及杂质，得到贴壁细胞。