[发明专利]一种人骨髓间充质干细胞体外培养扩增方法

权利要求书

1.一种人骨髓间充质干细胞体外培养扩增方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1）将DMEM培养基作为基础培养基，并依次调整浓度加入100mg/L-500mg/L的L-谷氨酰胺、15mg/L-150mg/L的维生素C、10mU/L-20mU/L的胰岛素、10U/L-50U/L的红细胞生成素和5μg/L-255μg/L的血管内皮生长因子等，然后以氢氧化钠调节PH值，最后加入胎牛血清并过滤除菌，得到新的培养基；

步骤2）收集人骨髓间充质干细胞原代细胞，制成细胞悬液，计细胞数，调整细胞密度后加入培养基，并接种至培养皿中；

步骤3）将培养皿置于37℃、5%的CO2、95%饱和湿度的CO2培养箱中培养；

步骤4）使用倒置相差显微镜观察细胞贴壁及生长状况，在首次传代后24小时首次换液，并在换液后每48小时换液1次；

步骤5）当细胞达80%至90%融合时，使用PBS洗掉非贴壁细胞及杂质，得到贴壁细胞。

2.根据权利要求1所述的一种人骨髓间充质干细胞体外培养扩增方法，其特征在于：所述步骤1）中的新的培养基需放入4℃的环境中保存。

3.根据权利要求1所述的一种人骨髓间充质干细胞体外培养扩增方法，其特征在于：所述步骤1）中PH值的范围为7.0-7.2。

4.根据权利要求1所述的一种人骨髓间充质干细胞体外培养扩增方法，其特征在于：所述步骤2）中原代细胞用胰蛋白酶消化制成细胞悬液。