[发明专利]原核细胞中高效表达有活性的细胞周期检测点激酶2及其分离纯化方法无效
| 申请号： | 201310292591.X | 申请日： | 2013-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN104278016A | 公开（公告）日： | 2015-01-14 |
| 发明（设计）人： | 张荣光 | 申请（专利权）人： | 常州三维生物制药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/70 |
| 代理公司： | 北京德恒律治知识产权代理有限公司 11409 | 代理人： | 章社杲;孙征 |
| 地址： | 213000 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种优化的CHK2 kinase Domain蛋白的分离纯化方法，所述CHK2 kinase Domain蛋白是CHK2截短至201位至531位氨基酸的片段，该方法中运用载体pGEX-6p-1和EcoRI、XhoI酶切位点以及BL21(DE3)表达纯化所述CHK2 kinase Domain蛋白，该方法中蛋白的纯化工艺流程简单，节约科研成本，蛋白的活性大幅度提高，并且能广泛应用于酶学，晶体学研究，以及高通量抑制剂筛选中。 | ||
| 搜索关键词： | 原核细胞 高效 表达 活性 细胞周期 检测 激酶 及其 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
具有CHK2蛋白酶活性的CHK2Kinase Domain蛋白的制备方法，包括将CHK2Kinase Domain蛋白的编码核酸序列与pGEX系列载体可操作性的连接，得到重组表达载体，将该重组表达载体转化到宿主细胞中，然后诱导宿主细胞中CHK2Kinase Domain蛋白的表达，离心收集宿主细胞，超声破碎宿主细胞收集上清，经GST亲和层析和分子筛层析后即得纯化的CHK2Kinase Domain蛋白。
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