[发明专利]一种葡萄霜霉病菌的单孢扩繁方法

摘要

本发明提供了一种用于葡萄霜霉病菌单孢分离扩繁的方法。该方法，首先诱导采集的霜霉病样重新产生游动孢子囊，将新产生的单个游动孢子囊或单根孢囊梗用针灸针（规格Ф0.25×40mm）转移到1%次氯酸钠处理过的无菌的对葡萄霜霉病菌敏感的葡萄叶圆片上，在18℃,16h光周期地恒温培养箱中培养7-10d，在叶圆片上形成的菌落即为分离到的葡萄霜霉病菌纯培养。该方法简便易行，并且能够以较高的成功率分离得到葡萄霜霉病菌，解决了传统真菌分离方法不适用于葡萄霜霉病菌单孢分离扩繁的问题。

主权项

一种葡萄霜霉病菌的单孢扩繁方法，包括下述步骤：1）在培养皿的皿底里叠放两层灭菌滤纸片，加入无菌水浸湿滤纸，盖上皿盖，得到保湿培养装置；2）采集单个霜霉病病斑的葡萄病叶，用无菌水将病叶表面和背面冲洗两次，然后在步骤1）所示的保湿培养装置内，把叶片放置在保湿培养皿内的滤纸上，保持背面朝上，同时保证浸湿叶正面；3）把步骤2）中放入叶片的培养皿置于光照培养箱培养，培养温度18°C，光照周期16h白天/8h黑夜，培养2‑4天；4）选取对霜霉敏感的葡萄品种的葡萄藤上自上而下的第2‑5片叶片，将采集的叶片首先进行解剖镜镜检，确保叶面无霜霉菌落或菌丝后，再进行消毒处理；5）将步骤4）消毒处理后的葡萄叶片用直径2cm打孔器从每一个叶中部打取葡萄叶圆片，将葡萄叶圆片背面向上平摆在步骤1）获得的保湿培养装置内的滤纸上；在解剖镜下用针灸针将经步骤2）培养过的霜霉病叶上新产生的游动孢子囊或孢囊梗转移到葡萄叶圆片上，盖上皿盖，按照步骤3）所述方法培养7‑10天，在叶圆片部位形成的菌落即为葡萄霜霉病菌分离单孢的纯培养。