[发明专利]一种人诱导多能干细胞的传代方法及应用

摘要

一种人诱导多能干细胞的传代方法及应用，该方法解决了传统克隆块传代方法使细胞易于分化，且转染效率低，难以进行基因修饰的问题。该方法为单细胞传代及其培养方法，包括如下步骤：用消化酶添加ROCK抑制剂将诱导多能干细胞克隆充分消化为单细胞；使用血球计数板或细胞计数仪计数；按照20000-30000细胞/平方厘米的密度将细胞铺至经ECM包被的培养板上；使用添加ROCK抑制剂的培养基对诱导多能干细胞置于37℃，8-15％CO2条件下培养；传代20代后，诱导多能干细胞的多能性未发生变化，包括多能性基因表达，体内及体外分化潜能等。

主权项

一种人诱导多能干细胞的传代方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：A.细胞传代前1‑2h铺细胞外基质到多孔板；B.从培养箱中取出汇合率75％‑85％需要传代的细胞，用DMEM/F12培养基洗一次，加Accutase消化酶置于37℃、体积分数8‑15％的CO2培养箱中消化；细胞基本被消化下来时，加mTeSR1培养基终止消化；C.离心，弃上清液，使用添加ROCK抑制剂的mTeSR1培养基重悬细胞，轻轻吹打均匀记数；D.按20000‑30000细胞/平方厘米的密度将细胞铺至经细胞外基质包被的培养板上，置于37℃、体积分数为8‑15％的CO2培养箱培养；E.第二天观察细胞密度、贴壁情况，若一切正常即撤去ROCK抑制剂，换新鲜mTeSR1培养基进行培养，以后每天换液，至汇合率再次达到75％‑85％既可传代或冻存。