[发明专利]一种葡萄白粉病菌的单孢分离方法

摘要

本发明提供了一种用于葡萄白粉病菌单孢分离的方法。该方法，首先诱导采集的白粉病样重新产生分生孢子，将新产生的单个或单串的分生孢子用针灸针转移到1%次氯酸钠处理过的无菌的对葡萄白粉病菌敏感的葡萄叶片上，记号笔标记接种点，在22℃，12h光周期地培养箱中培养10-14d，在接种点处形成的菌落即为分离到的葡萄白粉病菌的纯培养。该方法简便易行，并且能够以较高的成功率分离得到葡萄白粉病菌单孢的纯培养，解决了传统真菌分离方法不适用于葡萄白粉病菌单孢分离的问题。

主权项

一种葡萄白粉病菌的单孢分离方法，包括下述步骤：1）取两个培养皿叠放在一起，用打孔器在上面培养皿的皿底和下面培养皿的皿盖上同一位置打孔，在下面的培养皿中加入灭菌的超纯水得到双层培养皿装置；2）用细毛刷刷掉葡萄白粉病叶上白粉病菌产生的分生孢子，然后将叶片放入步骤1）中叠放的双层培养皿装置中，其中叶片叶面向上置于双层培养皿装置的上层培养皿中，叶柄从预先打好的孔插入下层培养皿，同时保证叶柄浸入超纯水中；3）把步骤2）中放入叶片的双层培养皿装置于22℃，光照周期为10‑14小时/天的培养箱中培养10‑14天；4）选取对葡萄白粉病菌敏感的葡萄品种的葡萄藤上第2‑5片幼嫩叶片，将采集的叶片首先进行解剖镜镜检，确保叶面无白粉菌落或菌丝后，进行消毒处理；将消毒处理后的葡萄叶片置于按照步骤1）的方法获得的双层培养皿装置中，叶片叶面向上置于双层培养皿装置的上层培养皿中，叶柄从预先打好的孔插入下层培养皿，同时保证叶柄浸入超纯水中；5）在解剖镜下用针将经步骤3）培养过的白粉病叶上新产生的单个或单串分生孢子转移到步骤4）的葡萄叶片上，用记号笔标记出叶片上的接种点；然后按照步骤3）所述方法培养，在记号笔标记部位形成的菌落即为葡萄白粉病菌分离单孢的纯培养。