[发明专利]免洗涤锚定延伸端粒亲和扩增检测端粒酶的方法及试剂盒有效
申请号: | 201310228271.8 | 申请日: | 2013-06-07 |
公开(公告)号: | CN103333958A | 公开(公告)日: | 2013-10-02 |
发明(设计)人: | 陈燃;金晓铮 | 申请(专利权)人: | 浙江今复康生物科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/48 |
代理公司: | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人: | 黄美娟;冷红梅 |
地址: | 310052 浙江省杭*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 本发明提供了一种新的端粒酶扩增方法——免洗涤的锚定延伸端粒亲和扩增(Washing-free,Anchored-extension and Telomeric-binding Amplification;WATA)。该方法利用一个锚定端粒酶引物进行端粒TTAGGGG序列(简称为G序列)延伸,以另一个带有通用PCR引物序列和6个单元的端粒CCCTAA序列(简称为C序列)的模板探针杂交结合在延伸的G序列上,通过酶切反应,除去未结合的模板探针,与G序列结合的模板探针进行PCR反应,扩增产物为一个固定长度的特异DNA片段。该方法将端粒酶活性检测过程简化为一管内完成的简单连续步骤,具有灵敏度高、特异性好等优点,适合推广到对各种来源的样品进行端粒酶活性检测。 | ||
搜索关键词: | 洗涤 锚定 延伸 端粒 亲和 扩增 检测 方法 试剂盒 | ||
【主权项】:
1.一种免洗涤锚定延伸端粒亲和扩增端粒酶的方法,所述方法是将待测样品的细胞裂解上清液加入固定有端粒酶引物的PCR反应管中,冰上放置使端粒酶与引物结合,吸干上清后,加入由模板探针、抑制探针、缓冲液和dNTP组成的端粒酶反应体系,在30~37℃保温进行端粒G序列延伸反应,随即在55~65℃保温进行杂交反应,之后吸干,加入含有限制性内切酶和PCR引物的PCR反应液,先以37℃保温10分钟,随即进行PCR反应,PCR反应产物用于荧光定量或琼脂糖凝胶电泳分析;所述端粒酶引物序列如下:5’-TCCGTCGAGCAGA
-3’;所述模板探针序列如下:5’-CCGTCACCCTGGATGCTGTAGGATCCCTAACCCTAACCCTAACC CTAACCCTAACCCTAAGGATCGCTCGCGGCTCTT-3’;所述抑制探针序列如下:5’-TAGGGTTAGGGATCCTACA-3’;所述PCR引物序列如下:5’-CCGTCACCCTGGATGCTGTAGG-3’,5’-AAGAGCCGCGAGCGATCCTT-3’。
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