[发明专利]ckmb在毕赤酵母中的表达和制备在审
| 申请号： | 201310223513.4 | 申请日： | 2013-06-06 |
| 公开（公告）号： | CN104232678A | 公开（公告）日： | 2014-12-24 |
| 发明（设计）人： | 罗朝领;肖建国;茅柳娟;马丽;王连会;王亮;王微微 | 申请（专利权）人： | 上海凯璟生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N1/19;G01N33/573;C12R1/84 |
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| 地址： | 201611 上海市南*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了ckmb在毕赤酵母中的表达和高效制备方法，其特征为，通过在毕赤酵母宿主细胞中进行含m基因和b基因在同一载体中串联表达的载体和工程菌的构建、发酵、纯化，制备重组CKmb。用该方法制备的ckmb可用于体外诊断试剂。 | ||
| 搜索关键词： | ckmb 酵母 中的 表达 制备 | ||
【主权项】：
m基因和b基因在同一载体中串联表达载体和工程菌的构建方法，包括如下步骤： 1)编码ckm亚基的基因克隆到pPICZα上的EcoRI和NotI之间，构建以AXO1为启动子α因子为分泌信号的重组质粒，命名为pPICZαA‑ckm； 2)编码ckb亚基的基因克隆到pPICZα上的EcoRI和NotI之间，构建以AXO1为启动子α因子为分泌信号的重组质粒，命名为pPICZαA‑ckb； 3)以BamH1和Bgl II双切pPICZαA‑ckb，凝胶回收表达框，命名为AOX1‑ckb； 4)将表达框AOX1‑ckb克隆到pPICZαA‑ckm的BamH1； 5)筛选ckm和ckb同一方向串联表达的重组质粒，命名为pPICZαA‑ckm‑ckb； 6)重组质粒pPICZαA‑ckm‑ckb转化毕赤酵母GS115，用不同浓度G418筛选出不同拷贝重组质粒的毕赤酵母GS115，筛选出表达量最高的一株命名为pPICZαA‑ckm‑ckb。
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