[发明专利]鸡传染性支气管炎N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法

摘要

鸡传染性支气管炎N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法，它涉及鸡传染性支气管炎纳米活苗的制备方法。本发明是要提供鸡传染性支气管炎N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法，方法为：一、取病毒液并加入到过滤除菌后的N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶液中，搅拌得到混合溶液A；二、向混合溶液A中滴加过滤除菌后的羧甲基壳聚糖溶液得到混合溶液B；三、将混合溶液B离心然后用温度为4℃的无菌去离子水洗涤沉淀3遍，收集固相物；四、将固相物加入到4℃的无菌去离子水中，然后再加入5％蔗糖脱脂乳溶液，再真空冷冻干燥，即完成。本发明应用于兽药领域。

主权项

鸡传染性支气管炎N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法，其特征在于鸡传染性支气管炎N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法按以下的实验步骤实现：一、取50～400μl IBV H120系病毒液加入无菌去离子水补足至2mL，然后加入到5mL浓度为0.5～2.0mg/mL的过滤除菌后的N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶液中，然后在室温、无菌条件下以搅拌速度为300r/min的条件下搅拌5min，得到混合溶液A；二、将混合溶液A在室温、无菌条件下以900r/min～1300r/min速度搅拌1min后，然后滴加2mL浓度为0.75～1.75mg/mL的过滤除菌后的N，O‑羧甲基壳聚糖溶液；然后在搅拌速度不变的条件下磁力搅拌20min～50min，得到混合溶液B；三、将混合溶液B于4℃、12000r/min离心20min，去上清，并用温度为4℃的无菌去离子水洗涤沉淀3遍，收集固相物；四、将固相物加入到4℃的无菌去离子水中，再加入质量浓度为5％的蔗糖脱脂乳溶液，真空冷冻干燥24h，得到鸡传染性支气管炎N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗，即完成鸡传染性支气管炎N‑2‑羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/羧甲基壳聚糖纳米活苗的制备方法；其中步骤一中IBV H120系病毒液为经过浓缩纯化后的鸡传染性支气管炎H120系病毒液，病毒含量为106.5EID50/0.1mL；步骤四中4℃的无菌去离子水与质量浓度为5％的蔗糖脱脂乳溶液的体积比为1∶1。