[发明专利]通过端粒酶筛选抗癌中药的方法

摘要

本发明涉及中药筛选方法，特别涉及一种通过端粒长度筛选抗衰老中药的方法；人胚肺二倍体成纤维细胞，在叔丁基过氧化氢的作用下加速其衰老，制作衰老细胞模型；在造模后，使用各种选取的中药浓缩复合物对细胞进行处理；处理结束后，提取细胞基因组DNA，检测其端粒长度，根据结果判断是否热性药物即具有抗衰老活性。

主权项

通过端粒酶筛选抗癌中药的方法，其特征在于按如下步骤实施A、选取端粒酶阳性细胞： HeLa细胞，乳腺癌MCF‑7细胞, 白血病细胞U937，白血病细胞HL60，淋巴瘤细胞CA46；B、含10%小牛血清的1640培养基培养肿瘤细胞，细胞于37℃、5% CO2培养箱中培养，待长满90%以上时，弃去瓶中原有的培养基，用PBS清洗两次，弃去，加入2ml 0.25%胰蛋白酶溶液于37℃培养箱中消化3min，转入刻度离心管中1000rpm离心3min，再加入2ml新鲜完全培养基重悬后，Cell Counter计数；C、 将重悬后的细胞稀释至5×103cell/ml，每孔加100ul接种96孔细胞培养板，次日换含不同浓度药物的培养基继续培养72h后，每孔加入5mg/ml MTT溶液12ul，于培养箱中继续培养4h；然后于平板离心机中，3000rpm离心5min后，吸出孔中溶液，加入150ul/孔DMSO溶液，再于微量振荡器上振荡10min，最后酶标仪上检测570nm和630nm处的吸光度值，则每个孔的吸光度值即为A570‑A630；每个浓度的吸光度值取三个平行孔的平均值；细胞增殖率为：（A实‑A阴对）/（A阴对‑A空）；结果与对照组比较；D、将重悬后的肿瘤细胞稀释至5×103cell/ml，每孔加500ul接种24孔细胞培养板，次日换含不同浓度药物的培养基继续培养72h和96h后，分别取样，使用PCR‑free方法测定端粒酶的活性，（n=3）。