[发明专利]用于甾体化合物A环1,2位脱氢的基因工程菌及发酵剂有效
| 申请号： | 201310077602.2 | 申请日： | 2013-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN103255095B | 公开（公告）日： | 2017-03-29 |
| 发明（设计）人： | 路福平;田耀;张会图;刘晓光 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N9/02;C12P33/02;C12R1/06 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司12209 | 代理人： | 王来佳 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用于甾体化合物A环1,2位脱氢的基因工程菌及发酵剂，所述工程菌的宿主菌为简单节杆菌，保藏编号为ACCC 12070，所述基因工程菌内含有如序列2所述的重组基因片段，所述基因工程菌的发酵底物包括醋酸可的松、含氟皮质激素、4‑AD。本发明构建的工程菌在含有酵母提取物、磷酸盐、玉米浆和葡萄糖等营养成分的基础上，通过恒温通气搅拌发酵，在甾体化合物浓度不高于10%(m/V)时，采用一次加投甾体化合物底物，在32～48小时内生物脱氢转化率能够达到95%以上；在甾体化合物浓度高于10%时，采用连续补加甾体化合物底物的情况下，在60小时内生物脱氢转化率能够达到95%以上。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 化合物 脱氢 基因工程 发酵剂 | ||
【主权项】：
一种用于甾体化合物A环1,2位脱氢的基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌是以保藏编号为ACCC 12070的简单节杆菌(Arthrobacter Simplex)为宿主菌通过同源重组将目的基因KsdD在氯霉素抗性基因的启动子控制下整合在所述简单节杆菌16SrDNA上构建而成；具体制备步骤如下：⑴以pXJM19上的Cm启动子作为目的基因KsdD的启动子，并以Cm作为筛选标记构建重组载体pTY5；所述pTY5重组载体的构建方法如图1所示；⑵重组载体pTY5通过Bam H I以及Hind III双酶切得到带有筛选标记Cm基因的重组片段，然后通过电转仪，将重组片段转入简单节杆菌中，重组片段在重组酶的作用下与基因组上的位点基因发生重组，从而将原来的基因置换下来，得到整合有目的基因的工程菌。
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