[发明专利]一种试管内脱除烟草花叶病毒和无毒苗的快速繁殖方法

摘要

本发明涉及一种试管内脱除烟草花叶病毒和无毒苗的快速繁殖方法。其步骤如下：（1）将烤烟型烟草品种的种子播于苗盘中，待种子萌发得处理后茎尖作为外植体备用。（2）茎尖接种至附加吲哚乙酸0.02～0.05mg·L-1和赤霉素1.50～1.70mg·L-1，食用白糖10g·L-1，琼脂条8.5g·L-1的基本培养基中进行脱除烟草花叶病毒培养；（3）培养温度控制在52～54℃，培养48～54d后，实现烟草花叶病毒脱除。（4）当茎尖生长至1.0cm时，即可切割0.05cm的茎尖进一步开展无毒苗培养，可直接应用于无花叶病毒烟草种苗的工厂化生产。腋芽萌发生长及茎段基部生根培养，成苗率可达99.3%。无毒苗成活率达95.0%以上。

主权项

一种试管内脱除烟草花叶病毒和无毒苗的快速繁殖方法，其特征在于步骤如下：（1）将烤烟型烟草品种的种子播于苗盘中，待种子萌发且苗长至3～5 cm时，得处理后茎尖作为外植体备用；（2）茎尖接种至附加吲哚乙酸0.02～0.05 mg·L‑1和赤霉素1.50～1.70 mg·L‑1，食用白糖10 g·L‑1，琼脂条8.5 g·L‑1的基本培养基中进行脱除烟草花叶病毒培养；基本培养基成份及使用用量：174 mg·L‑1(NH4)2SO4，360 mg·L‑1KNO3，122.5 mg·L‑1MgSO4·7H2O，218 mg·L‑1KH2PO4；18.4 mg·L‑1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L‑1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L‑1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L‑1ZnSO4·7H2O，0.32 mg·L‑1KI；（3）培养温度控制在52～54 ℃，培养48～54 d后，实现烟草花叶病毒脱除；（4）当茎尖生长至1.0 cm时，即可切割0.05 cm的茎尖进一步开展无毒苗培养。