[发明专利]一种试管内脱除烟草花叶病毒和无毒苗的快速繁殖方法

说明书

技术领域　

本发明涉及一种试管内脱除烟草花叶病毒和无毒苗的快速繁殖方法，属于植物繁殖技术。

背景技术

在现有技术中，烟草（Nicotiana tabacum）是茄科烟草属一年生草本植物。烟草除应用于卷烟工业，还可在开发食品和药物资源方面有诸多潜在用途。烟叶富含蛋白质，利用鲜烟叶提取蛋白，其亩产量可超过大豆，其他作物更无法相比。烟叶提取的蛋白可制作多种食品，剩下的烟叶仍可用作卷烟的原料。从烟叶中提取烟碱制成医药可防治人们的病患，制成农药可防治农作物害虫，其前景也是可观的。烟草是著名的模式作物，可当作生物反应器将其他作物的抗癌、抗艾滋病以及有益于人们健康的基因导入烟草，使其充分表达后利用生物技术提取，进一步加工成药物。如美国科学家已成功培养出抗体烟草，从中提取抗癌和抗病毒干挠素，对肺癌有良好的治疗作用。瑞典科学家将人体基因注入烟草植株，从收获的烟叶中提出血液蛋白质活化剂，可医治心脏病等。由此看出，烟草有益于健康的潜在用途并不比用作卷烟所起的经济效益少。

目前，为适应卷烟工业的需要，在全国烟草种植区内大力发展烤烟种植，但是国内烟叶总体质量较低，与国外特别是美国的烟叶相比有一定差距。出口国外价格低，使用价值不高，只能用作填充料。除烟草种植区划、施肥、成熟度、烤烟设施和工艺外，大多是烟草病毒病的存在，导致烟草产量和质量的降低。烟草病毒病主要有普通花叶病毒病、黄瓜花叶病毒病、马铃薯Y病毒病、蚀纹病毒病。我国各烟区都普遍发生，以云南、贵州、四川、黑龙江、吉林和辽宁等省受害较重。据调查，受害烟田达30%～70%。使烟叶内在品质下降，失去烘烤价值。

以上病毒中，危害较大且普遍的病毒为花叶病毒Tobacco mosaic virus(TMV) ，该病毒病自苗床期至大田成株期均可发生。移栽后20天到现蕾期，为发病高峰期，打顶后田间病株仍旱上升趋势，但主要在烟杈上显症，为害不大。幼苗被侵染后，新叶的叶脉组织变浅绿色，呈半透明的“明脉症”，迎光透视可见病叶大小叶脉十分清晰，几天后叶片形成黄绿相间的“花叶症”。大田期，烟株受侵染后，首先在心叶上发现“明脉”现象，尔后呈现花叶、泡斑、畸形、坏死等典型症状。轻型花叶只在叶片上形成黄绿相间的斑驳，叶形不变。以往防治多采用高效、高毒、高残留的化学药物进行防治，这就导致烟草中含有农药残留，使烟草质量和价格降低。我国应该坚持科技兴烟，提高烤烟质量，以抗病强品种选育和无病毒烟苗研究为方向的发展模式。

发明内容

本发明的目的是针对上述不足而提供一种方法简单、操作方便、效果好的试管内脱除烟草花叶病毒和无毒苗的快速繁殖方法。

本发明的技术解决方案是：一种试管内脱除烟草花叶病毒和无毒苗的快速繁殖方法，其步骤如下：

（1）将烤烟型烟草品种的种子播于苗盘中，待种子萌发且苗长至3～5 cm时，得处理后茎尖作为外植体备用。

（2）茎尖接种至附加吲哚乙酸0.02～0.05 mg·L^-1和赤霉素1.50～1.70 mg·L^-1，食用白糖10 g·L^-1，琼脂条8.5 g·L^-1的基本培养基中进行脱除烟草花叶病毒培养；基本培养基成份及使用用量：174 mg·L^-1(NH₄)₂SO₄，360 mg·L^-1KNO₃，122.5 mg·L^-1MgSO₄·7H₂O，218 mg·L^-1KH₂PO₄；18.4 mg·L^-1FeSO₄·7H₂O，24.9 mg·L^-1Na₂·EDTA·2H₂O；12.4 mg·L^-1MnSO₄·4H₂O，7.2 mg·L^-1ZnSO₄·7H₂O，0.32 mg·L^-1KI。优选吲哚乙酸0.02 mg·L^-1和赤霉素1.50 mg·L^-1。

（3）培养温度控制在52～54 ℃，培养48～54 d后，实现烟草花叶病毒脱除。