[发明专利]一种美人蕉茎尖组织培养的方法

摘要

本发明涉及一种美人蕉茎尖组织培养的方法，包括如下步骤：培养基的配制、外植体的选取与消毒、茎尖剥离、茎尖培养、不定芽诱导及增值、不定芽生根诱导、组培苗驯化及移栽。基本培养基选用MS培养基，蔗糖25～30g/L，琼脂粉8～9g/L，培养基pH5.7～5.8；茎尖培养用培养基为MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+L-脯氨酸50～200mg/L；不定芽诱导及增殖培养基为MS+6-BA2.0～6.0mg/L+CaCl250～800mg/L；生根培养基为MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L。本发明的优点：建立的美人蕉组培快繁技术体系种苗繁殖速度快，健壮均匀，移栽成活率高，适合优良美人蕉种苗脱毒及规模化生产。

主权项

一种美人蕉茎尖组织培养的方法，其特征在于：该方法包括以下几个步骤：1）、外植体的选取及处理：选取美人蕉地下带有芽的根茎，将根茎表面根切除、附着物洗净，然后将带芽的根茎带基部切成1cm见方，基部厚度0.5cm大小，作为组培用外植体；2）、茎尖剥离：无菌环境下，将经过消毒的外植体在解剖镜下，先用低倍镜一层一层剥离芽鳞，然后逐步增大放大倍数，继续剥离芽鳞，最后在40～45倍镜下切下0.2～0.5mm长的茎尖部分，最后切取茎尖的刀必须无菌且没有切过任何植物材料；3）、美人蕉茎尖培养：将切取的茎尖材料接种在茎尖培养用培养基为MS+6‑BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+脯氨酸50～200mg/L中，培养条件为：24±2℃，暗培养7～10d，然后将材料转移至25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；4）、不定芽诱导及增殖：茎尖培养获得的不定芽利用无菌的解剖刀将芽基部造成伤口，接种于不定芽诱导培养基中进行不定芽的诱导及增殖，不定芽诱导及增殖培养基为MS+6‑BA2.0～6.0mg/L+CaCl250～800mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；5）、不定芽生根诱导：从基部将高生长到3～5cm的丛生不定芽分开成单个不定芽，接入生根培养基中进行不定根的诱导，生根培养基为MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m‑2·s‑1；6）、组培苗驯化及移栽：不定芽基部长出2～3条1～2cm的不定根后，将组培移至温室，散射光培养5d后打开瓶盖，再培养1～2d，完成组培苗移栽前驯化，然后将组培苗从培养瓶取出，洗净组培苗表面琼脂，栽入基质中，保湿90％以上培养15d，然后在温室中正常培养。