[发明专利]一种美人蕉茎尖组织培养的方法

权利要求书

1.一种美人蕉茎尖组织培养的方法，其特征在于：该方法包括以下几个步骤：

1）、外植体的选取及处理：选取美人蕉地下带有芽的根茎，将根茎表面根切除、附着物洗净，然后将带芽的根茎带基部切成1cm见方，基部厚度0.5cm大小，作为组培用外植体；

2）、茎尖剥离：无菌环境下，将经过消毒的外植体在解剖镜下，先用低倍镜一层一层剥离芽鳞，然后逐步增大放大倍数，继续剥离芽鳞，最后在40～45倍镜下切下0.2～0.5mm长的茎尖部分，最后切取茎尖的刀必须无菌且没有切过任何植物材料；

3）、美人蕉茎尖培养：将切取的茎尖材料接种在茎尖培养用培养基为MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+脯氨酸50～200mg/L中，培养条件为：24±2℃，暗培养7～10d，然后将材料转移至25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

4）、不定芽诱导及增殖：茎尖培养获得的不定芽利用无菌的解剖刀将芽基部造成伤口，接种于不定芽诱导培养基中进行不定芽的诱导及增殖，不定芽诱导及增殖培养基为MS+6-BA2.0～6.0mg/L+CaCl₂50～800mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

5）、不定芽生根诱导：从基部将高生长到3～5cm的丛生不定芽分开成单个不定芽，接入生根培养基中进行不定根的诱导，生根培养基为MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

6）、组培苗驯化及移栽：不定芽基部长出2～3条1～2cm的不定根后，将组培移至温室，散射光培养5d后打开瓶盖，再培养1～2d，完成组培苗移栽前驯化，然后将组培苗从培养瓶取出，洗净组培苗表面琼脂，栽入基质中，保湿90％以上培养15d，然后在温室中正常培养。

2.根据权利要求1所述的美人蕉茎尖组织培养的方法，其特征在于：茎尖培养、不定芽诱导及增殖、不定芽生根诱导基本培养基均为MS培养基，蔗糖用量为25～30g/L，凝固剂为琼脂粉，用量为8～9g/L，培养基pH分装前调整为5.7～5.8。