[发明专利]一种美人蕉茎尖组织培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术、植物茎尖培养技术，主要是一种美人蕉茎尖组织培养的方法。

背景技术

美人蕉(Canna indica)，别名兰蕉、昙华，为美人蕉科、美人蕉属植物，多年生球根草本花卉，原产于美洲热带和非洲等地。美人蕉株高可达100～180cm，丛生，叶片大、叶片颜色丰富，花大，花色艳丽、颜色多样，花期长，是一种非常优良的园林绿化、景观美化植物。美人蕉叶片可吸收二氧化硫、氯化氢等有害物质，叶片虽易受害，但可重新长出新叶，很快恢复生长，也因此可作为监视有害气体污染指示植物，具有净化空气、保护环境作用。另外，美人蕉还可以用作药物治疗疮疡肿毒、子宫出血、白带、急性黄胆等疾病。现在已有一些城市将美人蕉作为主要绿化植物进行种植，但是由于传统繁殖方式种苗生产速度慢，严重限制了美人蕉大规模的应用。

目前，美人蕉的繁殖主要通过种子及块茎分株繁殖方式进行。但是目前市场需求大的品种基本上结实率很低、甚至不结实，种子数量有限，而通过块茎分株方式繁殖受到材料本身状态、生产季节及土地的限制，每年产量远远满足不了市场的需求。同时，由于美人蕉长期繁殖材料长期处地下，容易受到各种病毒的感染，由于美人蕉多采用无性繁殖，一旦感染便很难通过化学药物根除。已有研究表明，美人蕉主要感染病毒包括美人蕉黄斑驳病毒、黄瓜花叶病毒、菜豆黄花叶病毒、西红柿不育病毒及美人蕉黄色条纹病毒，严重降低了美人蕉的观赏价值。

植物茎尖培养被认为是目前最有效的植物脱毒材料获得手段，目前国内外关于美人蕉不同品种快速繁殖报道极少，且增值效率低，最高仅为1.67，至于美人蕉茎尖培养研究，尚未见相关报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种美人蕉茎尖组织培养的方法，解决美人蕉通过茎尖培养建立良好的美人蕉组培再生体系，为美人蕉脱毒培养、新品种培养及遗传改良等做好技术支持。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。这种美人蕉茎尖组织培养的方法，该方法包括以下几个步骤：

1)、外植体的选取及处理：选取美人蕉地下带有芽的根茎，将根茎表面根切除、附着物洗净，然后将带芽的根茎带基部切成约1cm见方，基部厚度约0.5cm大小，作为组培用外植体。

2）、茎尖剥离：无菌环境下，将经过消毒的外植体在解剖镜下，先用低倍镜一层一层剥离芽鳞，然后逐步增大放大倍数，继续剥离芽鳞，最后在40～45倍镜下切下0.2～0.5mm长的茎尖部分，最后切取茎尖的刀必须无菌且没有切过任何植物材料。

3）、美人蕉茎尖培养：将切取的茎尖材料接种在茎尖培养用培养基为MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+脯氨酸50～200mg/L中，培养条件为：24±2℃，暗培养7～10d，然后将材料转移至25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1。

4）、不定芽诱导及增殖：茎尖培养获得的不定芽利用无菌的解剖刀将芽基部轻轻造成一些伤口，接种于不定芽诱导培养基中进行不定芽的诱导及增殖，不定芽诱导及增殖培养基为MS+6-BA2.0～6.0mg/L+CaCl₂50～800mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1。

5）、不定芽生根诱导：从基部将高生长到3～5cm的丛生不定芽分开成单个不定芽，接入生根培养基中进行不定根的诱导，生根培养基为MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L，培养温度25±2℃，光照时间为12～14h/d，光照强度为45～60μ·mol·m^-2·s^-1。

6）、组培苗驯化及移栽：不定芽基部长出2～3条1～2cm的不定根后，将组培移至温室，散射光培养5d后打开瓶盖，再培养1～2d，完成组培苗移栽前驯化，然后将组培苗从培养瓶取出，洗净组培苗表面琼脂，栽入基质中，保湿90％以上培养15d，然后在温室中正常培养。