[发明专利]表达 PCV2密码子优化ORF1和ORF2串联基因的重组病毒

摘要

本发明涉及一种PCV2密码子优化ORF1和ORF2串联基因的重组病毒，属于生物制药领域。人工合成密码子优化的PCV2ORF1和ORF2基因，命名为YHsfORF1-2。将YHsfORF1-2克隆入杆状病毒表达载体pFastBacHTA中，即获得重组质粒pFBHYHsfORF1-2。而后将重组质粒转染Sf9细胞，获得重组杆状病毒vFBHYHsfORF1-2。在重组杆状病毒vFBHYHsfORF1-2中，ORF1和ORF2蛋白能够成功的高效表达，并能形成病毒样颗粒。本发明还涉及该重组病毒在疫苗方面的应用，动物试验证明由该重组病毒所制的灭活疫苗，可刺激机体产生高效的免疫应答，对PCV2有较好的免疫保护作用。

主权项

表达2型猪圆环病毒（PCV2）密码子优化ORF1和ORF2串联基因的重组病毒，其特征在于，是由以下方法构建而成：1） 密码子优化PCV2 ORF1和ORF2基因人工合成经密码子优化的PCV2 ORF1和ORF2基因，该基因定名为YHsfORF1‑2，其序列为SEQ.ID.NO.1，将YHsfORF1‑2连入pMD‑18T载体，获得pMD‑18T‑ YHsfORF1‑2；2） 重组质粒pFBHYHsfORF1‑2的构建与鉴定将pMD‑18T‑YHsfORF1‑2中YHsfORF1‑2基因用SpeI和XholI双酶切，克隆到用相同双酶切线性化的pFastBacHTA载体上，得到重组质粒pFBHYHsfORF1‑2，转化含helper质粒与Bacmid DNA的大肠埃希菌DH10Bac，制备pFBHYHsfORF1‑2 Bacmid DNA，并用PCR法进行鉴定；3） 表达2型猪圆环病毒密码子优化ORF1和ORF2串联基因的重组病毒的获得将pFBHYHsfORF1‑2 Bacmid DNA转染Sf9细胞，获得重组病毒vFBHYHsfORF1‑2。