[发明专利]尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法

摘要

尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的高效液相色谱-质谱-质谱联用检测方法，使用衍生化后HPLC-MS-MS法测定尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL，包括用测定旋光并比对的方法确定(S)-NNAL和(R)-NNAL的构型并作为参照，或用Mosher方法确定(S)-NNAL-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯和(R)-NNAL-甲基-d3-(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酸酯的构型并作为参照；配制含有rac-NNAL和氘代rac-NNAL-甲基-d3的混合标准溶液，再进行Mosher衍生化，然后对衍生化以后的混合标准溶液进行HPLC-MS-MS分析;最后进行尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL检测。该方法具有检测限低、稳定性好、前处理简单、快速准确的优点。

主权项

尿液中(S)‑NNAL和(R)‑NNAL的高效液相色谱‑质谱‑质谱联用检测方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：①用测定旋光并比对的方法确定(S)‑NNAL和(R)‑NNAL的构型并作为参照，或用Mosher方法确定(S)‑NNAL‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯和(R)‑NNAL‑甲基‑d3‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯的构型并作为参照；②配制含有rac‑NNAL和氘代rac‑NNAL‑甲基‑d3的混合标准溶液，再进行Mosher衍生化，然后对衍生化以后的混合标准溶液进行HPLC‑MS‑MS分析;用确定构型后的(S)‑NNAL‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯和(R)‑NNAL‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯通过保留时间确定相应的色谱峰保留时间，采用内标法分别建立(S)‑NNAL‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯对其相应内标的标准溶液工作曲线和(R)‑NNAL‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯对其相应内标的标准溶液工作曲线；③将在室温下解冻后的尿液样品摇匀，准确移取10mL于50mL试管中，加入rac‑NNAL‑甲基‑d3溶液，再用MIP‑NNAL固相萃取小柱净化，淋洗后洗脱，干燥过滤后进行Mosher衍生化，浓缩至干，再用7/3的乙腈/水溶解后上HPLC‑MS‑MS检测。