[发明专利]一种改造重组酶Cre的方法及其在植物中的应用有效
| 申请号： | 201310052609.9 | 申请日： | 2013-02-18 |
| 公开（公告）号： | CN103146818A | 公开（公告）日： | 2013-06-12 |
| 发明（设计）人： | 高渊;罗克明;文梦玲;汪丽君;李超锋 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N1/30 |
| 代理公司： | 重庆华科专利事务所 50123 | 代理人： | 康海燕 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 一种改造重组酶Cre的方法及其在植物中的应用，它涉及将重组蛋白Cre拆分为无活性的N端（NCre）和C端（CCre）两部分，并且对拆分蛋白进行体外原核表达和活性检测，同时分别构建新的Cre/loxp系统，将其应用于植物当中，实现了当N端和C端在同一个植物细胞时恢复重组活性而发生删除，反之则不能。本发明还包括核定位信号NLS对该系统的影响以及所有的植物表达载体和体外原核表达载体。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 改造 重组 cre 方法 及其 植物 中的 应用 | ||
【主权项】：
一种改造重组酶Cre的方法，其特征在于，其包括以下步骤：（1）将重组蛋白Cre在第59和60个氨基酸之间直接拆分为无活性的N端（NCre）和C端（CCre）两部分，在各个拆分片段之前融合核定位信号NLS；（2）将拆分蛋白NCre和CCre构建到原核表达载体pMAL‑C2X上，诱导表达纯化之后，体外检测拆分蛋白的活性；（3）将含有一对同向识别位点loxp的融合基因loxP‑nos‑loxP构建于pCAMBIA1305.1上得到中间载体pCA‑LoxP，以此载体为骨架将拆分蛋白NCre和CCre构建上去，得到含有Cre/loxp系统的植物表达载体；（4）将构建的植物表达载体通过发根农杆菌介导的遗传转化转化模式植物烟草，获得转基因毛状根，通过GUS组织染色和PCR分子检测改造的Cre/loxp系统的重组活性。
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