[发明专利]一种植物内生菌的分离方法

摘要

本发明公开了一种植物内生菌的分离方法，包括采样、表面灭菌、组织研磨、分离及纯培养步骤，具体是选择健康植株进行采样、分类保藏，在乙醇溶液中浸泡，再在次氯酸钠溶液中浸泡，用无菌水冲洗，称取0.3~0.5g，加入无菌水，研磨。研磨后的浆液梯度稀释，涂布后平板培养，每处理重复3~5次，根据菌落的形状、大小、干湿、颜色、质地、表面、边缘及透明度8个表型特征挑取单菌落，进行纯化培养，将经纯培养的单菌落移入试管斜面保存。本发明有效避免了人为扩大或丢失植物内生菌的多样性分离结果，为研究植物内生菌的菌落组成特征，丰富内生菌基因资源具有十分重要的作用。

主权项

一种植物内生菌的分离方法，其特征在于包括采样、表面灭菌、组织研磨、分离及纯培养步骤，具体包括：A、采样：选择生长性状良好、无病害症状的健康植株进行采样，将得到的植物材料按不同植物及组织类别分类保藏；B、表面灭菌：将采集的植物材料在65~75%的乙醇溶液中浸泡30~90s后，再在有效氯含量0.5~1.5%的次氯酸钠溶液中浸泡40~320s，用无菌水冲洗3~5次；C、组织研磨：称取0.3~0.5g经预处理后的植物材料，与灭菌研磨珠一并置于离心管中，加入500~700µl无菌水，研磨120~240s，频率为20~40r/s；D、分离及纯培养：研磨后的浆液梯度稀释10~104倍，各取200µl稀释液涂布后在25~32℃下平板培养24~48h，每样品重复3~5次，根据菌落表型特征的不同挑取具有代表性的单菌落，进行平板划线培养，将经纯培养的单菌落移入试管斜面保存。