[发明专利]建立全雌黄颡鱼繁育种群的方法

摘要

本发明公开了一种建立全雌黄颡鱼繁育种群的方法，包括如下步骤：步骤1、人工催产与人工授精；步骤2、性逆转；步骤3、性逆转鱼的遗传性别鉴定；步骤4、扩群；步骤5、全雌黄颡鱼繁育种群的建立，最终建立全雌黄颡鱼繁育种群。该发明由于采用激素性逆转结合黄颡鱼染色体特异分子标记的集成技术，不用测交方法就能确定XX♂生理雄鱼，缩短了育种时间，与测交方法比较，可以缩短一代。因省略了雌核发育步骤，可以降低人工诱导雌核发育对受精卵遗传物质的损伤，提高了XX♀雌鱼的获得率，有明显的经济和社会效益。

主权项

建立全雌黄颡鱼繁育种群的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1、人工催产与人工授精：选择体表无伤、腹部膨大柔软、性腺发育良好的普通雌鱼（15‐20尾/kg）用绒毛膜促性腺激素、鱼用促黄体素释放激素类似物2号和多巴胺拮抗物地欧酮对每条鱼胸鳍基部进行一次注射或两次注射，注射总剂量为每kg雌鱼使用HCG2500～3000IU+LRH‐A230～40ug+DOM6～10mg，将雌鱼置于26℃的水中，经24小时后挤出成熟的卵子，将卵子置于冰浴上低温保存备用；选取生殖突微红的雄鱼（15‐20尾/kg），每kg雄鱼使用HCG2500～3000IU+LRH‐A215～20ug+DOM6～10mg注射催产，一次注射，催产后对雄鱼进行解剖取出精巢，用剪刀将精巢剪碎，再用精子保存液洗滤出精子，将精子置于冰浴上低温保存备用；取卵子和精子混合进行干法人工受精；把受精卵置于27℃生化培养箱中恒温孵育成雄鱼和雌鱼鱼苗并全部出膜；待卵黄吸收后，鱼苗用卤虫幼体作为开口饵料；步骤2、性逆转：将普通雌性黄颡鱼性逆转成生理雄鱼，以卤虫幼体作为雄激素载体，将卤虫幼体在100～250IU的甲基睾丸溶液中浸泡1小时，再抽滤取出富集雄激素的卤虫投喂已开口摄食的人工繁殖黄颡鱼苗，每天上午、下午和晚上各投喂一次，投喂量以30分钟内吃完为准，连续投喂40天，经雄性激素处理后存活的鱼苗中部分XX♀雌鱼性逆转成为XX♂生理雄鱼，XY♂雄鱼不变；将用甲基睾丸处理过的所有幼鱼转移至水泥池用海马牌幼鳖粉状配合饲料培育至8cm以上，即可从外表区分雌雄；雄鱼的生殖器已开始突起，而雌鱼则无；剔除XX♀黄颡鱼，剩雄性黄颡鱼XX♂、XY♂备用；步骤3、性逆转鱼的遗传性别鉴定：用Y染色体特异标记Pf‐Y62引物对筛选出的性逆转黄颡鱼XX♂、XY♂进行基因型PCR鉴定，剔除含有Y染色体的黄颡鱼XY♂，留XX♂生理雄鱼备用；步骤4、扩群：XX♀雌鱼和XX♂生理雄鱼繁育种群的快速扩群，取步骤3中已被确认的养至性成熟的XX♂生理雄鱼与普通XX♀雌鱼交配，产生100%XX♀雌鱼，在鱼苗开口时，取一部分XX♀雌鱼按步骤2，用雄激素诱导性逆转成为XX♂生理雄鱼；步骤5、全雌黄颡鱼繁育种群的建立：取步骤4中XX♀雌鱼和XX♂生理雄鱼交配，可持续生产XX♀雌鱼，重复步骤4和步骤5，建立全雌黄颡鱼繁育种群。