[发明专利]一种南美蟛蜞菊体外快繁的两步法

摘要

本发明公开了一种南美蟛蜞菊体外快繁的两步法，属于南美蟛蜞菊的体外繁殖技术领域。用叶片作为外植体，接种于添加NAA的培养基上，诱导产生不定根，再转移到添加不同激素的MS培养基上诱导不定芽的产生达到再生植株的形成。利用该方法诱导南美蟛蜞菊不定根及及无菌再生植株，为遗传转化等分子水平研究该植物打下良好的基础。该方法公开的南美蟛蜞菊的体外繁殖方法，其方法简单可行，诱导率高，且诱导周期短。

主权项

一种南美蟛蜞菊体外快繁的两步法，其特征在于按照下述步骤进行：(1)  取南美蟛蜞菊长势较好的无病虫害的叶片用蒸馏水冲洗干净，用体积比75%乙醇擦拭叶片，再用蒸馏水冲洗3‑5次，置于无菌操作台上；(2)  用体积比70%‑75%乙醇浸泡1 min，并不断地摇动，后倒掉乙醇，加入体积比0.1%(v/v)的升汞HgCl2浸泡6‑8 min，倒掉升汞，灭菌蒸馏水冲洗3‑5次，置于无菌培养皿中；(3)  用剪刀将叶片边缘剪掉，将叶片剪成长1 cm左右的长方形，叶背向下接种于不定根诱导的培养基上，并将切口紧贴培养基，每个培养皿接种3‑4片叶片，培养皿封口后，置于光照培养箱中进行不定根的诱导，培养温度24℃，光照周期16/8 h，湿度70%；(4)  5‑6 d后叶边缘及叶脉开始生长少量的愈伤组织，8‑10 d 颗粒状的愈伤组织上开始产生不定根，取生长不定根的紧密的愈伤组织转移到不定芽分化培养基上进行不定芽的诱导；(5)  5‑10 d 左右产生丛生芽，10‑15 d得到完整的南美蟛蜞菊植株。